2014 Fiscal Year Annual Research Report
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23360367
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| Research Institution | Nagoya University |
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Principal Investigator |
中野 秀雄 名古屋大学, 生命農学研究科, 教授 (00237348)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
兒島 孝明 名古屋大学, 生命農学研究科, 助教 (40509080)
岩崎 雄吾 名古屋大学, 生命農学研究科, 准教授 (50273214)
小林 功 独立行政法人農業・食品産業技術総合研究機構, 食品総合研究所, 研究員 (70425552)
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| Project Period (FY) |
2011-04-01 – 2015-03-31
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| Keywords | 酵素 / エマルジョン / マイクロビーズ / ハイスループットスクリーニング / ペルオキシダーゼ |
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| Outline of Annual Research Achievements |
申請者らが独自に開発した、エマルジョンPCRと無細胞蛋白質合成系を組み合わせたDNA-蛋白質のビーズディスプレイ技術を用い、非 常に大規模なライブラリー(10の9乗)を構築し、セルソーターによりスクリーニングする、ギガスクリーニングシステム(GSS)を確立することを目的として研究を行なっている。今年度は以下の様な成果が得られた。
1)一作年度に開発したDNA結合タンパク質を利用したビーズへの提示法を、西洋ワサビペルオキシダーゼおよびマンガンペルオキシダー ゼに適用したところ、両方のタンパク質共にビーズ上に提示され、チラミドを用いたアッセイ系により、ビーズ上で活性を確認することができた。さらにセルソーターを用いて、ハイスループットにスクリーニング可能であることを示した。 2)マイクロフォーカシング法によるW/Oエマルジョン作製装置をさらに改良し、均一性の高いなエマルジョンを短時間に作製することに成功した。さらに本装置を用いて、T7RNApolymeraseの活性スクリーニングシステムおよび蛋白質提示システムにおいてより定量的なアッセイが可能であることを示した。 3)本ビーズディスプレイをDNA-転写因子の結合解析に用い、ゲノムSELEXによる結合配列濃縮の濃縮度評価を行った。最終的に次世代シーケンスにより解析したところ、非常に効率よく結合DNA配列を検出することができた。
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| Research Progress Status |
26年度が最終年度であるため、記入しない。
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| Strategy for Future Research Activity |
26年度が最終年度であるため、記入しない。
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[Journal Article] Role of disulfide bond isomerase DsbC, calcium ions, and hemin in cell-free protein synthesis of active manganese peroxidase isolated from Phanerochaete chrysosporium..2014
Author(s)
Ninomiya, R., Zhu, B., Kojima, T., Iwasaki, Y., and Nakano, H.
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Journal Title
J. Biosci. Bioeng
Volume: 117
Pages: 652-657
DOI
Peer Reviewed / Acknowledgement Compliant
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