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2011 Fiscal Year Annual Research Report

組織内で変換・生成するビタミンK2の変換機構とその生理的役割に関する研究

Research Project

Project/Area Number 23380070
Research Category

Grant-in-Aid for Scientific Research (B)

Research InstitutionTohoku University

Principal Investigator

白川 仁  東北大学, (連合)農学研究科(研究院), 准教授 (40206280)

Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) 駒井 三千夫  東北大学, (連合)農学研究科(研究院), 教授 (80143022)
後藤 知子  東北大学, (連合)農学研究科(研究院), 助教 (00342783)
KeywordsビタミンK / メナキノンー4 / 生体内変換 / 抗炎症 / 抗糖尿病作用
Research Abstract

メナキノン-4(MK-4)の新しい作用(抗炎症効果、インスリン分泌促進)と生体内変換の分子機構の解析を行った。
1)MK-4によるインスリン分泌促進作用の解析  ビタミンK欠乏飼料をKKAyマウスに与え60日間飼育した。経口糖負荷試験とインスリン負荷試験の結果、欠乏食は耐糖能の悪化とインスリン抵抗性を誘導した。また、膵臓および肝臓グルコキナーゼ、肝臓型ピルビン酸キナーゼmRNA量が有意に低下していた。以上のことから、ビタミンK欠乏食は、臓器中のMK-4量を低下させることにより、インスリン分泌、糖代謝関連遺伝子の発現量を変化させ、糖尿病の進行を早めることが示唆された。
2)MK-4による抗炎症作用の分子機構の解明  免疫共沈降法によりMK-4で処理した後のIKK複合体形成に変化は見られなかったが、LPS刺激後のTRAF6-TAK1-IKKγの相互作用、TAK1のK63ユビキチン化量が増加していた。以上のことから、MK-4の抗炎症作用は、TRAF6-TAK1-IKK複合体の形成を促進させ、LPS刺激後に起こる複合体の形成から解離に至るフィードバックループを阻害することによって起こる可能性が示唆された。
3)MK-4生体内変換の反応機構の解析  ヒト肝癌由来培養細胞をもちいて構築したin vitro変換系において、Ubiad1以外の変換律速因子として、側鎖供与体に焦点をあて解析した。スタチンで処理したところ、MK-4生成量は減少した。一方、タンパク質プレニル化酵素阻害剤で処理した場合、MK-4生成量が増加した。このことから、生成したMK4の側鎖部分はメバロン酸経路に由来すること、本経路で合成されるゲラニルゲラニル二リン酸、またはその代謝物が側鎖の基質として利用されていることが明らかになった

Current Status of Research Progress
Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

1)MK-4によるインスリン分泌促進作用 本年度は、KKAyマウスを使用して解析を行ったが、病態悪化が急速に進み、最終的には欠乏食の影響が見えづらい結果となった。本動物以外の糖尿病モデル動物でメナキノン-4の影響の解析を行う必要がある。
2)MK-4による抗炎症作用の分子機構 免疫沈降に使用したIKKγの抗体の特異性が弱く、一部不明瞭なデータが得られた。他社抗体によって確認する必要がある。
3)MK-4生体内変換の反応機構の解析 ゲラニルゲラニル二リン酸の細胞内量をLC-MS/MSによって測定する予定で、定量法の確立を目指したが、定量的解析を行うまで、まだ条件検討が必要である。

Strategy for Future Research Activity

1)ビタミンK欠乏飼料で飼育した動物の膵臓ランゲルハンス島を分離・培養し、グルコースに応答したインスリン分泌能について解析を行う。また、β細胞を分離し、遺伝子発現、各種シグナル分子の発現量を測定する。
2)MK-4処理したマクロファージのTAK1のK63ユビキチン化量が増加していたことから、脱ユビキチン化酵素の発現量を測定する。また、MK-4処理した細胞のコンディション培地に抗炎症性の高分子成分が含まれることから、これを分離し、その性状を明らかにする。
3)ゲラニルゲラニル二リン酸など、イソプレノイドで細胞を処理した場合の細胞内イソプレノイド量をLC-MS/MS法で測定する。

  • Research Products

    (26 results)

All 2013 2012 2011 Other

All Journal Article (7 results) (of which Peer Reviewed: 6 results,  Acknowledgement Compliant: 1 results) Presentation (17 results) Book (2 results)

  • [Journal Article] Dietary supplementation of geranylgeraniol suppresses lipopolysaccharide-induced inflammation via the inhibition of NF-κB activation in rats.2013

    • Author(s)
      Giriwono PE, Shirakawa H, Ohsaki Y, Hata S, Kuriyama H, Sato S, Goto T, Komai M.
    • Journal Title

      Eur. J. Nutr.

      Volume: 52 Pages: 1191-1199

    • DOI

      10.1007/s00394-012-0429-y

    • Peer Reviewed / Acknowledgement Compliant
  • [Journal Article] ビタミンK2012

    • Author(s)
      白川仁
    • Journal Title

      Functional Food

      Volume: 5 Pages: 340-345

  • [Journal Article] アトピー性皮膚炎の進展におけるペリオスチンの役割2012

    • Author(s)
      小口一起
    • Journal Title

      ビタミン

      Volume: 86 Pages: 685-686

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Dietary vitamin K ameliorates the reduction in testosterone production induced by LPS administration in rat testis.2011

    • Author(s)
      Naofumi Takumi
    • Journal Title

      Food Func.

      Volume: 2 Pages: 406-411

    • DOI

      10.1039/C1FO10058K

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Menaquinone-4 enhances testosterone production in rats and testis-derived tumor cells.2011

    • Author(s)
      Asagi Ito
    • Journal Title

      Lipids Health Dis.

      Volume: 10 Pages: 158

    • DOI

      10.1186/1476-511X-10-158

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] 無菌ラットにおけるビタミンK欠乏ストレス応答反応2011

    • Author(s)
      駒井三千夫
    • Journal Title

      無菌生物

      Volume: 41 Pages: 61-68

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] ゲラニルゲラニオールは、リポポリサッカライド誘導の炎症性サイトカインの発現を抑制する2011

    • Author(s)
      白川仁
    • Journal Title

      無菌生物

      Volume: 41 Pages: 123-126

    • Peer Reviewed
  • [Presentation] マクロファージ細胞における、ビタミンKのNF-kB活性化阻害

    • Author(s)
      渡邉貴哉
    • Organizer
      第65回日本栄養・食糧学会大会
    • Place of Presentation
      東京
  • [Presentation] Geranylgeraniol supplementation suppresses LPS-induced NF-kappaB signal transducers activation in THP-1 cells and rat

    • Author(s)
      Puspo Edi Giriwono
    • Organizer
      第65回日本栄養・食糧学会大会
    • Place of Presentation
      東京
  • [Presentation] ラット組織におけるファルネソール、ゲラニルゲラニオール、ファルネシル二リン酸、ゲラニルゲラニル二リン酸のLC-MS/MS定量

    • Author(s)
      松塚健太郎
    • Organizer
      第65回日本栄養・食糧学会大会
    • Place of Presentation
      東京
  • [Presentation] Geranylgeraniol improves insulin sensitivity in KK-Ay mice fed high fat diet

    • Author(s)
      Puspo Edi Giriwono
    • Organizer
      第63回日本ビタミン学会大会
    • Place of Presentation
      広島
  • [Presentation] ヒト肝癌由来細胞を用いたメナキノン-4変換生成系の確立と変換機構の解析

    • Author(s)
      桂井朋子
    • Organizer
      第84回日本生化学会大会
    • Place of Presentation
      京都
  • [Presentation] ヒト由来培養細胞におけるメナキノン-4変換生成系の確立と変換機構の解析

    • Author(s)
      桂井 朋子
    • Organizer
      第45回日本栄養・食糧学会東北支部大会
    • Place of Presentation
      盛岡
  • [Presentation] ビタミンK欠乏食給餌がKK-Ayマウスの糖代謝に及ぼす影響

    • Author(s)
      平原啓甫
    • Organizer
      日本農芸化学会2012年度大会
    • Place of Presentation
      京都
  • [Presentation] マウス精巣由来細胞におけるゲラニルゲラニオールの男性ホルモン産生促進

    • Author(s)
      吉田理紗
    • Organizer
      日本農芸化学会2012年度大会
    • Place of Presentation
      京都
  • [Presentation] KK-AyマウスにおけるビタミンK1欠乏状態と糖代謝の関係

    • Author(s)
      平原啓甫
    • Organizer
      第66回日本栄養・食糧学会大会
    • Place of Presentation
      仙台
  • [Presentation] ヒト由来培養細胞を用いたメナキノン-4変換生成系の確立とビタミンK変換機構の解析

    • Author(s)
      桂井朋子
    • Organizer
      第66回日本栄養・食糧学会大会
    • Place of Presentation
      仙台
  • [Presentation] ゲラニルゲラニオールによるテストステロン産生促進

    • Author(s)
      吉田理紗
    • Organizer
      第66回日本栄養・食糧学会大会
    • Place of Presentation
      仙台
  • [Presentation] 糖尿病モデルマウスにおけるビタミンKが糖代謝に及ぼす影響

    • Author(s)
      平原啓甫
    • Organizer
      日本ビタミン学会第64回大会
    • Place of Presentation
      岐阜
  • [Presentation] ゲラニルゲラニオールはマウス精巣由来細胞においてテストステロン産生を促進する

    • Author(s)
      吉田理紗
    • Organizer
      日本ビタミン学会第64回大会
    • Place of Presentation
      岐阜
  • [Presentation] ヒト肝ガン由来培養細胞を用いたビタミンKの生体内変換機構の解析

    • Author(s)
      桂井朋子
    • Organizer
      日本ビタミン学会第64回大会
    • Place of Presentation
      岐阜
  • [Presentation] Geranylgeraniol supplementation suppresses LPS-induced NF-κB signal transducers activation in THP-1 cells and rats

    • Author(s)
      Puspo E. Giriwono
    • Organizer
      BioMed Central Meeting “Metabolism, diet and disease
    • Place of Presentation
      Washington DC, USA
  • [Presentation] ヒト由来培養細胞を用いたビタミンK生体内変換反応の側鎖基質の解析

    • Author(s)
      桂井朋子
    • Organizer
      第85回日本生化学会大会
    • Place of Presentation
      福岡
  • [Presentation] 遺伝的糖尿病モデルマウスの糖代謝に及ぼすビタミンK欠乏食の影響

    • Author(s)
      平原啓甫
    • Organizer
      第46回日本無菌生物ノートバイオロジー学会
    • Place of Presentation
      伊勢原
  • [Book] 基礎栄養学2013

    • Author(s)
      白川仁
    • Total Pages
      163(うち107-122)
    • Publisher
      アイ・ケイコーポレーション
  • [Book] 「機能性食品の作用と安全性百科」第5章 循環系に作用する成分-血圧、血中脂質、血流などとの関係 ビタミンK2012

    • Author(s)
      白川仁
    • Total Pages
      280
    • Publisher
      丸善出版

URL: 

Published: 2014-07-24  

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