2013 Fiscal Year Annual Research Report
破骨細胞膜に共存する空胞型プロトンポンプと電位依存性プロトンチャネルの機能
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23390043
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| Research Institution | Osaka City University |
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Principal Investigator |
久野 みゆき 大阪市立大学, 医学(系)研究科(研究院), 准教授 (00145773)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
酒井 啓 大阪市立大学, 医学(系)研究科(研究院), 研究員 (90382192)
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| Project Period (FY) |
2011-04-01 – 2014-03-31
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| Keywords | 生理学 / 生体分子 / 細胞・組織 / 生理活性 / シグナル伝達 / プロトン |
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| Research Abstract |
1) V-ATPaseによるH+チャネル内胞化の検討. NH4Clを用いた実験から、細胞内pHが6.5以上に5分以上曝されるとH+チャネルの内胞化が始まりpH 7.5前後まで増強することが明らかになった。細胞内pH（SNARF）と膜の蛍光マーカー（FM1-43）を用い、破骨細胞の細胞膜に存在するH+ポンプ（V-ATPase）による細胞内pH上昇がendocytosisを促進させる事を確認した。更にH+チャネル頻回刺激による細胞内pH上昇でもチャネルの内胞化を生じた。外因性、内在性いずれのpH上昇刺激によるendocytosis促進もdynaminに依存した。同様の現象はマイクログリアでも起こったが、H+チャネル遺伝子を発現させたCOS細胞では見られなかった。以上の結果より、破骨細胞やマイクログリアでは生理的な細胞内pHでH+チャネルの約40%は細胞内プールに存在し、刺激に応答し細胞膜に移動する事が推測された。これはH+チャネル活性の新しい調節メカニズムである。2) 骨代替基質の開発. 魚燐上に分化させた破骨細胞でV-ATPaseとH+チャネルの干渉はガラス面に分化させた場合に比較し少なかった。研究を続行し干渉の抑止機構・機能的距離を解明したい。3) phagosomeにおけるV-ATPaseとH+チャネルの干渉/ H+チャネル分子のH+センサー機能. H+電流と蛍光の同時測定のためPhotometry systemを設置した。現在、H+チャネル活性と蛍光マーカー（FITC）をつけたzymosan貪食胞のpHの同時記録、H+チャネル逆転電位による細胞膜近傍pHとSNARFによる細胞内バルクpHの同時記録の予備実験を行っており、細胞内pH動態解析の新規手法として確立することを目指している。成果の一部は論文２報および国内外の学会・研究会（計７回）で発表した。
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| Current Status of Research Progress |
Reason
25年度が最終年度であるため、記入しない。
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| Strategy for Future Research Activity |
25年度が最終年度であるため、記入しない。
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[Presentation] The recovery speed of lipid emulsion therapy largely depends on “lipid sink”: An electrophysiological study using voltage-gated proton channels.2013
Author(s)
Hori, K., Matsuura, T., Hasaka, M., Mori, T., Kuno, M, Nishikawa,K.
Organizer
Euroanesthesia 2013 (ヨーロッパ麻酔学会)
Place of Presentation
バルセロナ国際会議場、スペイン
Year and Date
20130601-20130604
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