2013 Fiscal Year Annual Research Report
糖タンパク質糖鎖合成障害の実態解明を核とする疾患グライコプロテオミクス研究
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23390081
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| Research Institution | Research Institute, Osaka Medical Center for Maternal and Child Health |
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Principal Investigator |
和田 芳直 地方独立行政法人大阪府立病院機構大阪府立母子保健総合医療センター(研究所), 研究所, 所長兼部長 (00250340)
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| Project Period (FY) |
2011-04-01 – 2015-03-31
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| Keywords | 糖鎖 / 代謝異常 / 質量分析 / グライコプロテオミクス / 糖タンパク質 |
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| Research Abstract |
全国の小児科医からの依頼を受けて原因不明の精神運動発達遅滞患者に対する先天性グリコシル化異常症ＣＤＧのスクリーニングを継続した。平成２５年度は８４件を分析し、７家系（Ｎ型５家系、ムチン型２家系）に糖鎖構造異常を見出した。これらのうちＮ型糖鎖の２家系については、他機関において遺伝子解析による遺伝子同定が完了した。また、国内機関（鳥取大）から５検体、ドイツ・ミュンスター大から４０検体の確認分析依頼を受けてＣＤＧに関する国内外の機関連携強化に取り組んだ。
さらに、分析法の改良に取り組んだ。患者血清から免疫アフィニティ法によって精製したトランスフェリン（80kDa）をそのままエレクトロスプレイイオン化飛行時間型質量分析計で分析できるよう、トラップカラムを用いる液体クロマトグラフィー質量分析法を構築した。これにより数マイクロリットルの患者血清を用いて分析を１０分で完了できるようになった。この新しい分析法は十分な分解能をもっているので、Ｎアセチルノイラミン酸（残基質量291 Da）１残基の脱離を正確に同定できる。従来、残基単位の変化を検出するには糖ペプチドを試料とする方法を用いていたが、この新しい方法によってワークフローを大幅に簡略化でき、過年度に開発したアポリポ蛋白Ｃ３のムチン型糖鎖を解析する方法と本法の組み合わせがＣＤＧスクリーニング分析法の完成形である。ムチン型糖鎖のＮアセチルノイラミン酸付加率およびＮ型糖鎖の付加率のそれぞれの正常値の設定が最後に残された問題で、最終年度である次年度に解決したい。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
先天性グリコシル化異常症の全体像解明の技術基盤整備が本研究の中心であり、Ｎ型とＯ型糖鎖解析法を確立できたことから全体として順調に進んでいるといえる。
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| Strategy for Future Research Activity |
ＣＤＧの全体像解明は一機関のみでできるものでないことから、これまで行ってきた内外機関との連携を継続し、また、この研究課題によって確立した新しい分析法を普及させる。また、分析結果の解釈を数値化できるよう、特に、N型糖鎖の付加率をもとめる方法を作る。
Ｎ型とムチン型以外の糖鎖については、Ｏマンノース糖鎖の解析を、他機関との共同研究によって進めたい。
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Research Products
(14 results)
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[Journal Article] De novo mutations in SLC35A2 encoding a UDP-galactose transporter cause early-onset epileptic encephalopathy2013
Author(s)
Kodera H, Nakamura K, Osaka H, Maegaki Y, Haginoya K, Mizumoto S, Kato M, Okamoto N, Iai M, Kondo Y, Nishiyama K, Tsurusaki Y, Nakashima M, Miyake N, Hayasaka K, Sugahara K, Yuasa I, Wada Y, Matsumoto N, Saitsu H.
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Journal Title
Hum Mutat
Volume: 34
Pages: 1708-1714
DOI
Peer Reviewed
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[Journal Article] Suppression of heregulin beta signaling by single N-glycan deletion mutant of soluble ErbB32013
Author(s)
Takahashi M, Hasegawa Y, Ikeda Y, Wada Y, Tajiri M, Ariki S, Takamiya R, Nishitani C, Araki M, Yamaguchi Y, Taniguchi N, Kuroki Y.
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Journal Title
J Biol Chem
Volume: 288
Pages: 32910-32921
DOI
Peer Reviewed
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