2012 Fiscal Year Annual Research Report
内因性免疫によるＥＢＶ感染制御機構と上咽頭癌発癌機構に関する研究
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23390396
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| Research Institution | Kanazawa University |
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Principal Investigator |
吉崎 智一 金沢大学, 医学系, 教授 (70262582)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
杉本 寿史 金沢大学, 医学系, 助教 (20547179)
脇坂 尚宏 金沢大学, 大学病院, 講師 (70377414)
近藤 悟 金沢大学, 大学病院, 助教 (70436822)
遠藤 一平 金沢大学, 大学病院, 助教 (30547154)
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| Project Period (FY) |
2011-04-01 – 2015-03-31
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| Keywords | 上咽頭癌 / 内陰性免疫 / EBV / APOBEC |
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| Research Abstract |
EBVのレセプターはB細胞表面に発現するCD21である．1990年代の報告ではCD21は上皮，Tリンパ球で発現しないとされる．しかし今日，細胞表面抗原解析テクノロジーが飛躍的に進歩し，発現量の少ない蛋白解析が可能となり，過去の通説が次々と刷新されている．
上気道における内因性免疫発現を調査した研究は皆無である。そこで，過去10年に金沢大学病院で同一患者から摘出された口蓋および咽頭扁桃パラフィン標本を用いて，まず口蓋および咽頭扁桃におけるEBV感染細胞と感染様式，さらに，APOBECファミリーのうち村松博士から抗体を供与されたAID，APOBEC3G発現を年代ごとに比較した．すなわち、生検組織から採取した粘膜上皮をトリプシン処理後，フローサイトメトリー（ＦＣＭ）にてLMP1（II型潜伏感染）， BZLF1， CD3， CD20， CD21， CK18， CK19， CD133（上皮系幹細胞マーカー）発現を検討しEBV感染細胞の分画および感染様式を検討した。パラフィン組織上での免疫組織化学的解析の至適条件の設定を行ったAID，APOBEC3G，に対する免疫組織化学法にてEBV陽性細胞の分画と感染状態，さらにAPOBEC発現を定性的に評価し、咽頭扁桃と口蓋扁桃において明らかな発現パターンの差がないことを判明した。
また、口蓋扁桃，咽頭扁桃いずれにおいてもEBVが感染細胞内で潜伏感染しており，感染細胞と共存する潜伏感染 ( EBV転写産物EBERs，LMP1が発現)パターンを示す細胞のポピュレーションはまれであった ．
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
本申請では，EBVの組織トロピズムおよび発癌機構を分子レベルで解明する足がかりとして，咽頭扁桃と口蓋扁桃における上皮およびBリンパ球のEBV感受性について，近年のHIV研究によりクローズアップされた内因性免疫という新しい免疫学的概念に基づいて解析することを目的としている．
23年度／24年度を通じて口蓋扁桃と咽頭扁桃におけるAPOBECファミリー発現ならびにEpstein-Barr ウイルス遺伝子産物発現に関する実験系の最適化が順調に進んだ。そして、データも順調に蓄積しつつある。
以上の点をふまえておおむね順調に進展しているという自己評価をするに至った。
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| Strategy for Future Research Activity |
25年度はEBV陰性の上咽頭癌組織と陽性の上咽頭癌組織におけるこれらのマーカー発現を検討するとともに、上咽頭癌と同様にウイルス発癌様式を取る事が注目されている中咽頭癌（５０％がHPV陽性）組織おいてこれらのマーカー発現を比較検討し、ウイルス発癌様式の差異を明らかにする．
ウイルス感染細胞でウイルス増殖が起こると，その細胞はがん化するどころか溶解してしまう．EBV・HPVともに腫瘍細胞ではウイルスは潜伏感染様式を取るはずである。そこで、昨年に続き、咽頭・口蓋扁桃由来のBリンパ球・上皮細胞におけるウイルス複製トロピズムを評価するii) 各々の細胞分画におけるAPOBECファミリー発現プロフィールを解析するしたところ APOBEC3ファミリーの発現がウイルス発癌に特徴的であるとの知見を得た．そこで、感染許容細胞と非許容細胞におけるcDNAライブラリーを作製しサブトラクション法によりAPOBEC3ファミリーの発現に焦点を当てて解析する．
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