オキサゾロン連続クラスター損傷に関する突然変異および修復反応の解析

2013 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 23510069
• Research Institution: Tokushima Bunri University
• Principal Investigator: 喜納 克仁 徳島文理大学, 薬学部, 准教授 (70360534)
• Keywords: 連続クラスター損傷 / グアニン酸化損傷

Research Abstract

本課題の研究目的は、「グアニン連続配列を酸化することで、オキサゾロン(Oz)連続クラスター損傷を作成する。このOz連続クラスター損傷を用いて、DNAポリメラーゼによる塩基取り込み解析と伸長効率の解析などを行う。」ことである。昨年度は、一昨年度で検討した方法を変更し、Oz連続配列を含む6merと13mer、11merと相補鎖30merを混合した状態でライゲーションを行い、目的の30merを合成することに成功した。本年は、目的の実験を行うため、量を増やすことを検討した。しかしながら不幸なことに、原料を合成するためのDNA合成機が故障し、研究を遂行することができなかった。３月末にようやく修理され、次年度に延長申請することで、引き続き研究を遂行する。

Current Status of Research Progress

4: Progress in research has been delayed.

Reason

研究に必要なDNA合成機が８月に故障し、点検したが原因は判明せず、一旦研究室に機器を戻して合成を再開した。しかし、１０月に再び故障した。研究遂行に必要な量に満たなかったので、受託合成の依頼を検討したが、他の必要経費が支出できなくなるほど非常に高額となった。そのため、修理を再度依頼した。ようやく故障原因が判明し、３月に納品された。原料を用いる実験の経費の支出があまりなかったので、未使用額が生じた。

Strategy for Future Research Activity

研究実績の概要でも述べたように、一昨年度にライゲーション法による30merオリゴマーの構築に成功した。DNA合成機の故障により、昨年度に行うことができなかったOzOz入りオリゴマーを次年度作成し、種々のDNAポリメラーゼ反応を行う予定である。

Expenditure Plans for the Next FY Research Funding

本年度は不幸なことに、原料を合成するためのDNA合成機が故障し、研究を遂行することができなかった。３月末にようやく修理され、次年度に延長申請することで、引き続き研究を遂行することとなった。このような状況であるので、消耗品の支出がほとんど必要なかった。なお、DNA合成機の修理費用は科研費ではなく、大学から支給された研究費でまかなった。
HPLCに関わる溶媒とHPLCカラム、DNAポリメラーゼ作成のための試薬類、細胞培養試薬、放射性同位体元素の購入、論文出版のための費用や学会発表費用の支出計画を項目ごとに見直した上で、目的達成を加速するため、次年度前半で得られたデーターによっては新たな機器や分子設計用のソフトウェアの購入を検討する可能性も考える。

Research Products

• [Journal Article] Direct analysis of guanine oxidation products in double-stranded DNA and proposed guanine oxidation pathways in single-stranded, double-stranded or quadruplex DNA. (2014)
  • Author(s): Morikawa M., Kino K.*, Oyoshi T., Suzuki M., Kobayashi T., Miyazawa H.
  • Journal Title: Biomolecules Volume: 4 Pages: 140-159
  • DOI: 10.3390/biom4010140
  • Peer Reviewed / Open Access / Acknowledgement Compliant
• [Journal Article] Product analysis of photooxidation in isolated quadruplex DNA; 8-oxo-7,8-dihydroguanine and its oxidation product at 3′-G are formed instead of 2,5-diamino-4H-imidazol-4-one. (2013)
  • Author(s): Morikawa M., Kino K.*, Oyoshi T., Suzuki M., Kobayashi T., Miyazawa H.
  • Journal Title: RSC Adv, Volume: 3 Pages: 25694-25697
  • DOI: 10.1039/C3RA44290J
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] The stability of an oxidative guanine damages pairing with guanine in DNA polymerases. (2013)
  • Author(s): Suzuki, M., Ohtsuki, K., Morikawa, M., Watanabe, T., Kobayashi, T., Miyazawa, H., Kino, K.*
  • Journal Title: Photomed. Photobiol. Volume: 35 Pages: 17-18
• [Journal Article] The oxidation of single-strand, double-strand, or quadruplex DNA by UVA radiation with riboflavin. (2013)
  • Author(s): Morikawa, M., Oyoshi, T., Suzuki, M., Kobayashi, T., Miyazawa, H., Kino, K.*
  • Journal Title: Photomed. Photobiol. Volume: 35 Pages: 19-20
• [Presentation] 4本鎖DNAにおけるグアニン光酸化生成物の解析 (2014)
  • Author(s): 森川雅行、大吉崇文、鈴木雅代、小林隆信、小森理絵、宮澤宏、喜納克仁
  • Organizer: 日本化学会 第94春季年会
  • Place of Presentation: 名古屋
  • Year and Date: 20140327-20140330
• [Presentation] P19細胞の神経分化過程におけるTal2遺伝子の発現調節 (2014)
  • Author(s): 小林隆信，中平佑甫，岡本奈々，森啓朗，喜納克仁，宮澤宏
  • Organizer: 日本薬学会 第１３４年会
  • Place of Presentation: 熊本
  • Year and Date: 20140327-20140330
• [Presentation] グアニン酸化損傷とグアニンの塩基対を含む二本鎖DNAの安定性 (2014)
  • Author(s): 鈴木雅代，喜納克仁，森川雅行，渡邊泰平，浅田恵理子，小林隆信，宮澤宏
  • Organizer: 日本薬学会 第１３４年会
  • Place of Presentation: 熊本
  • Year and Date: 20140327-20140330
• [Presentation] Analysis of guanine photooxidation in quadruplex DNA. (2013)
  • Author(s): 森川雅行・喜納克仁、大吉崇文・鈴木雅代、小林隆信・宮澤宏
  • Organizer: 第３６回日本分子生物学会年会
  • Place of Presentation: 神戸
  • Year and Date: 20131203-20131206
• [Presentation] The calculated stability of DNA duplees containing oxazolone pairing with guanine. (2013)
  • Author(s): 鈴木雅代・浅田恵理子、渡邊泰平・喜納克仁、森川雅行、小林隆信、宮澤宏
  • Organizer: 第３６回日本分子生物学会年会
  • Place of Presentation: 神戸
  • Year and Date: 20131203-20131206
• [Presentation] Analysis of nucleotide incorporations opposite an oxidative guanine damage by Y family DNA polymerases. (2013)
  • Author(s): 鈴木雅代・浅田恵理子、渡邊泰平・喜納克仁、森川雅行、小林隆信、宮澤宏
  • Organizer: 第３６回日本分子生物学会年会
  • Place of Presentation: 神戸
  • Year and Date: 20131203-20131206
• [Presentation] The effects of base pairs containing an oxidative guanine damage on translesion synthesis (2013)
  • Author(s): 渡邊泰平、鈴木雅代、喜納克仁・浅田恵理子、森川雅行、小林隆信、宮澤宏
  • Organizer: 第３６回日本分子生物学会年会
  • Place of Presentation: 神戸
  • Year and Date: 20131203-20131206
• [Presentation] The expression and regulation of TAL2 gene during neural differentiation of P19 cells. (2013)
  • Author(s): 小林隆信、中平佑甫、岡本奈々、森啓朗、喜納克仁、宮澤宏
  • Organizer: 第３６回日本分子生物学会年会
  • Place of Presentation: 神戸
  • Year and Date: 20131203-20131206
• [Presentation] Analysis of the site reactivity and the kinds of guanine photooxidation products in quadruplex DNA. (2013)
  • Author(s): Masayuki Morikawa, Takayuki Oyoshi, Masayo Suzuki, Takanobu Kobayashi, Hiroshi Miyazawa, Katsuhito Kino
  • Organizer: 環境変異原学会24回大会
  • Place of Presentation: 岡山
  • Year and Date: 20131129-20131130
• [Presentation] Photooxidation of guanine in quadruplex DNA by UVA radiation with riboflavin. (2013)
  • Author(s): Masayuki Morikawa, Takayuki Oyoshi, Masayo Suzuki, Takanobu Kobayashi, Hiroshi Miyazawa, Katsuhito Kino
  • Organizer: ISNAC 2013
  • Place of Presentation: 横浜
  • Year and Date: 20131113-20131115
• [Presentation] The calculated stability of DNA duplexs containing DNA damages pairing with guanine. (2013)
  • Author(s): Masayo Suzuki, Eriko Asada, Katsuhito Kino, Taihei Watanabe, Masayuki Morikawa, Takanobu Kobayashi, Hiroshi Miyazawa
  • Organizer: ISNAC 2013
  • Place of Presentation: 横浜
  • Year and Date: 20131113-20131115
• [Presentation] Formation of a flavin-linked cysteine (2013)
  • Author(s): Masayuki Morikawa, Takeshi Senda, Masayo Suzuki, Takanobu Kobayashi, Hiroshi Miyazawa, Katsuhito Kino
  • Organizer: 2013ECSOC (17th)
  • Place of Presentation: Electronic conferences
  • Year and Date: 20131101-20131130
• [Presentation] The calculated stability of DNA duplexes containing an oxidized guanine lesion pairing with guanine. (2013)
  • Author(s): Masayo Suzuki, Katsuhito Kino, Masayuki Morikawa, Taihei Watanabe, Eriko Asada, Takanobu Kobayashi, Hiroshi Miyazawa
  • Organizer: 2013ECSOC (17th)
  • Place of Presentation: Electronic conferences
  • Year and Date: 20131101-20131130
• [Presentation] グアニン酸化損傷を含む塩基対のDNA ポリメラーゼ中における安定性 (2013)
  • Author(s): 大槻和也、鈴木雅代、喜納克仁、渡邊泰平、小林隆信、宮澤宏
  • Organizer: 第52回日本薬学会･日本薬剤師会・日本病院薬剤師会中国四国支部学術大会
  • Place of Presentation: 松山
  • Year and Date: 20131026-20131027
• [Presentation] Y family polymerase のグアニン酸化損傷に対する乗り越え反応 (2013)
  • Author(s): 渡邊泰平、鈴木雅代、喜納克仁、小林隆信、宮澤宏
  • Organizer: 第52回日本薬学会･日本薬剤師会・日本病院薬剤師会中国四国支部学術大会
  • Place of Presentation: 松山
  • Year and Date: 20131026-20131027
• [Presentation] 4 本鎖DNAの形成により引き起こされるグアニン光酸化損傷の種類、および酸化位置の変化 (2013)
  • Author(s): 森川雅行・大吉崇文・鈴木雅代・小林隆信・宮澤宏・喜納克仁
  • Organizer: 日本化学会秋期事業 第３回 CSJ化学フェスタ2013
  • Place of Presentation: 東京
  • Year and Date: 20131021-20131023
• [Presentation] DNAポリメラーゼ中におけるグアニン酸化損傷とグアニンの塩基対安定性 (2013)
  • Author(s): 鈴木雅代・大槻和也、渡邊泰平・小林隆信・小森理絵・宮澤宏・喜納克仁
  • Organizer: 第35回日本光医学・光生物学会
  • Place of Presentation: 浜松
  • Year and Date: 20130712-20130713
• [Presentation] リボフラビンを用いたグアニン光酸化損傷の解析 (2013)
  • Author(s): 森川雅行・大吉崇文・小林隆信・小森理絵・宮澤宏・喜納克仁
  • Organizer: 第35回日本光医学・光生物学会
  • Place of Presentation: 浜松
  • Year and Date: 20130712-20130713
• [Presentation] ビタミンとDNA損傷４ (2013)
  • Author(s): 喜納克仁
  • Organizer: 新世代の生物有機化学研究会2013（第9回）
  • Place of Presentation: 仙台
  • Year and Date: 20130622-20130622
• [Remarks] 徳島文理大学 香川薬学部 分子生物学講座
  • URL: http://kp.bunri-u.ac.jp/kph04/index.html