2013 Fiscal Year Annual Research Report
リパーゼ超誘導の分子機構解明と高立体選択性リパーゼの創製
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23580119
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| Research Institution | Chuo University |
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Principal Investigator |
石塚 盛雄 中央大学, 理工学部, 教授 (50168241)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
赤沼 元気 中央大学, 理工学部, 助教 (30580063)
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| Keywords | リパーゼ / リパーゼ・スーパーインデューサー / 高級アルコール / 界面活性タンパク質 / 結晶化 / 脂質代謝 / ポリエステルの蓄積 / プロテオーム解析 |
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| Research Abstract |
1．難水溶性の高級アルコールを誘導剤として用いた場合、P15界面活性タンパク質遺伝子破壊株ではリパーゼ分泌量が著しく低下したが、P15遺伝子補完株では回復した。このタンパク質をEliA（effector protein of lipase induction）と命名し、FEMS Microbiology Letter誌に掲載されたが、更にEliAの構造と機能の詳細を明らかにするために、ドイツ、フライブルク大学のOliver Einsle教授とEliAタンパク質の結晶化と構造解析に関する共同研究を行っている。EliAの結晶を得ることが出来、X線回折実験により2.1～3.0Åの解像度が得られた。高相同性配列を有するタンパク質あるいはペプチドのX線結晶解析はされていないので、位相を特定するために重原子置換法、あるいはSe-Met置換タンパク質創製法を試みている。
2．リパーゼ遺伝子とeliAの転写調節領域の塩基配列相同性がほとんどないことから別の転写制御を受けていると示唆された。
3. リパーゼ超誘導剤添加時におけるリパーゼとEliAの超共分泌システムの統一的分子機作を解明するために、難水溶性高級アルコールあるいは水溶性長鎖エーテルを添加して培養し、分泌タンパク質と膜タンパク質のプロテオーム解析を行った。二次元電気泳動とPeptide Mass Fingerprinting（PMF）法により各誘導条件下で特異的に発現する幾つかのタンパク質を同定することができ、この共超発現・分泌ネットワークの統一的理解が可能になると考えられる。
4. 難水溶性高級アルコールを誘導剤として用いた場合、ポリエステル（PHB）と多糖が蓄積したが、EliA欠損株では蓄積しなかったので、脂質代謝におけるEliAの更なる重要性が示唆された。
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[Journal Article] Single mutations introduced in the essential ribosomal proteins L3 and S10 cause sporulation defect in Bacillus subtilis2013
Author(s)
Genki Akanuma, Shota Suzuki, Koichi Yano, Hideaki Nanamiya, Yousuke Natori, Eri Namba, Kazuya Watanabe, Kazumi Tagami, Takuya Takeda, Yuka Iizuka, Ako Kobayashi, Morio Ishizuka, Hirofumi Yoshikawa, and Fujio Kawamura
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Journal Title
J. Gen. Appl. Microbiol.
Volume: 59(2),
Pages: 105-117
DOI
Peer Reviewed
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