2011 Fiscal Year Research-status Report
がん抑制遺伝子によるＥＴＳ転写制御因子ＭＥＦの発現制御機構の解明
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23590082
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| Research Institution | Kumamoto University |
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Principal Investigator |
スイコ メリー・アン・ソテン 熊本大学, 生命科学研究部, 助教 (20363525)
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| Project Period (FY) |
2011-04-28 – 2014-03-31
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| Keywords | がん抑制遺伝子 / 転写因子 / 翻訳後発現制御 / MEF / p53 / MDM2 |
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| Research Abstract |
近年，申請者は，がん抑制遺伝子である p53 が E2F1 への結合を介して Myeloid elf-1 like factor (MEF) の発現を転写レベルで抑制することを見出した（Taura M, Suico MA, et al., Nucl Acids Res. 2010）．本研究では，MEF の発現制御機構の全容解明を究極の目的とし，p53 による MEF の翻訳後発現制御機構の解明を行なった．その結果，p53陽性細胞に比べ，p53 欠損細胞におけるMEFの発現量は上昇していたことから，p53は，MEFの蛋白質発現量を負に制御する因子であることが明らかになった．一方，p53によるMEF蛋白質の発現抑制には，MEF蛋白質の安定性の変化が関与していることがCHXチェイス実験で明らかになり，p53は，MEF蛋白質発現のみならずその機能をも抑制することを見いだした．また，p53によるMEFの発現抑制は，プロテアソーム阻害剤であるMG-132により阻害されたことから，p53は，MEF蛋白質のプロテアソーム分解を促進することが明らかになった．最後に，p53が影響を与えるプロテアソーム分解制御因子であるE3リガーゼのスクリーニングを行い，p53は，MDM2の発現レベルを転写依存的に亢進し，その結果として，MEFの発現量を減少させるというユニークなメカニズムが存在することが明らかになった．
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
平成23年度は，がん抑制遺伝子 p53 による MEF の翻訳後制御機構の解明を中心に検討する予定であり，最終的に，p53がプロテアソーム分解制御因子であるE3リガーゼのMDM2の発現レベルを転写依存的に亢進し，その結果として，MEFの発現量を減少させるというユニークなメカニズムが存在することが明らかになり，当初の計画通りに計画が進行した．
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| Strategy for Future Research Activity |
がん抑制遺伝子 p53 による MEF の翻訳後制御機構の解明が当初予定通りに進行したが，未だに不明な点もある．そこで，平成24年度以降は，さらに，MDM2とMEFの関係性に着目し，より詳細なデータ解析を行う．具体的には，(1) MDM2がMEFの安定性に影響を与えるか否か，(2) MDM2とMEFの相互作用部位を，mutagenesis法やマンマリアンツーハイブリッドシステムを用いた解析により同定，(3) MEFの分解が引き起こされる局在の同定（核内か細胞質か？），(4) MDM2以外のE3リガーゼの関与の詳細検討，を実施する．また，当初予定であったがん抑制遺伝子 pRb による MEF の制御機構の解明に関する基礎検討も可能であれば実施する．
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| Expenditure Plans for the Next FY Research Funding |
本研究で実施する実験のほとんどは，細胞培養系を用いた遺伝子導入実験，リポーターアッセイ，RT-PCR，免疫沈降法である．これらの実験には，伝子導入試薬：Mirus社LT1（１本約3万円）．レポーターアッセイ：Promega社のDual luciferase assay Kit（1000回分１0万円）． RT-PCR：SYBR Green Kit（１反応1000円）．抗体（１本約3-5万円）などを用いる予定である，また，本研究領域は，非常に進展が早いため，その情報収集を目的として，に本願学会およびアメリカ細胞生物学会に参加することで，研究の動向をさぐる．さらに，平成24年度は論文投稿を目標とする．
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[Journal Article] Diethyldithiocarbamate induces apoptosis in HHV-8-infected primary effusion lymphoma cells via inhibition of the NF-κB pathway.2012
Author(s)
Matsuno T, Kariya R, Yano S, Morino-Koga S, Taura M, Suico MA, Shimauchi Y, Matsuyama S, Okamoto Y, Shuto T, Kai H, Okada S.
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Journal Title
Int J Oncol.
Volume: 40(4)
Pages: 1071-1078
Peer Reviewed
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[Journal Article] Hyperthermia With Mild Electrical Stimulation Protects Pancreatic β-Cells From Cell Stresses and Apoptosis.2012
Author(s)
Kondo T, Sasaki K, Matsuyama R, Morino-Koga S, Adachi H, Suico MA, Kawashima J, Motoshima H, Furukawa N, Kai H, Araki E.
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Journal Title
Diabetes.
Volume: 61(4)
Pages: 838-847
Peer Reviewed
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[Journal Article] Rb/E2F1 Regulates the Innate Immune Receptor Toll-Like Receptor 3 in Epithelial Cells.2012
Author(s)
Taura M, Suico MA, Koyama K, Komatsu K, Miyakita R, Matsumoto C, Kudo E, Kariya R, Goto H, Kitajima S, Takahashi C, Shuto T, Nakao M, Okada S, Kai H.
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Journal Title
Mol Cell Biol.
Volume: 32(8)
Pages: 1581-1590
Peer Reviewed
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[Journal Article] Glucose Uptake in Rat Skeletal Muscle L6 Cells Is Increased by Low-Intensity Electrical Current Through the Activation of the Phosphatidylinositol-3-OH kinase (PI-3K) / Akt Pathway.2011
Author(s)
Yano S, Morino-Koga S, Kondo T, Suico MA, Koga T, Shimauchi Y, Matsuyama S, Shuto T, Sato T, Araki E, Kai H.
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Journal Title
J Pharmacol Sci.
Volume: 115(1)
Pages: 94-98
Peer Reviewed
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