2013 Fiscal Year Annual Research Report

閉経後高血圧の新しい発症経路の解明：ＡＴ１受容体・ＲＧＳ・ＳＰＬの相互作用解析

Research Project

Project/Area Number	23590296
Research Institution	Chiba University
Principal Investigator	木村定雄千葉大学, 医学(系)研究科(研究院), 教授 (40134225)
Co-Investigator(Kenkyū-buntansha)	西山眞理子千葉大学, 医学(系)研究科(研究院), 助教 (00092081) 碓井宏和千葉大学, 医学(系)研究科(研究院), 講師 (90375634)
Keywords	閉経後高血圧 / アンジオテンシン / アンジオテンシン受容体 / RGS / スピノフィリン
Research Abstract	１）RGS蛋白質による血管作動性受容体シグナルの抑制効果:血管作動性ペプチドであるアンジオテンシンII 受容体AT1を293T細胞に安定発現した細胞を作成した。AT1a受容体シグナルに対するR4ファミリー蛋白質(RGS1、RGS2、RGS3、RGS4、RGS5、RGS8、RGS16)の抑制効果の比較を行った結果、AT1受容体シグナルはRGS3とRGS8がRGS2と同等以上に強力に抑制効果を示した。２）各RGSのN末端部欠損変異体の抑制効果の検討: N末端部を欠損したmycタグ付きのRGSドメイン部のみの変異体を作製した。AT1a受容体シグナルについて、N末端部欠損のRGS蛋白質ドメイン部の抑制効果を全長RGSと比較した。その結果、RGS2全長では強力な抑制作用を示すが、N末端部のないRGS2ドメインは著しく減弱した。一方、RGS3ドメインおよびRGS8ドメインは全長の抑制と同程度に強力に抑制した。３）RGS8ドメインとRGS4ドメインのキメラ変異体の抑制効果の解析：昨年度、RGS8ドメインがなぜ強力にAT1受容体シグナルを抑制するかを解明するために、抑制効果の小さいRGS5ドメインとのキメラ蛋白質を作製し、RGSドメイン部を3分割し、RGS8ドメイン変異体（885、858、588）およびRGS5ドメイン変異体（558、585、855）を作製した。AT1a受容体に対する各ドメインのキメラの抑制効果は、RGSドメイン885は抑制活性が弱く、RGSドメイン558は活性が強かった。（858、588）はRGS8、（585、855）はRGS5とほぼ同じであった。つまり、RGS8ドメイン部の3番目の一番C末端部が大切であることが判明した。今年度は、さらにその効果を確認するために、RGS8ドメインとRGS4ドメインのキメラを作製し、同様にキメラの抑制効果を解析した。その結果、884は抑制が弱く、448は抑制効果が強かった。以上より、RGS8の抑制の強さは、RGS8ドメインの3種類のエクソンのうち、最もC末端部のエクソン部が重要であることが判明した。