2011 Fiscal Year Research-status Report
シトルリン化酵素ＰＡＤによる分子修飾に伴う病態修飾の解析と臨床応用
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23590441
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| Research Institution | Tokyo Metropolitan Geriatric Hospital and Institute of Gerontology |
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Principal Investigator |
丸山 直記 地方独立行政法人東京都健康長寿医療センター(東京都健康長寿医療センター研究所), 東京都健康長寿医療センター研究所, 副所長 (00115940)
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| Project Period (FY) |
2011-04-28 – 2014-03-31
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| Keywords | シトルリン化 / PAD / 測定系 |
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| Research Abstract |
シトルリン化酵素PADの２型及び４型の組み換え蛋白の作製を実施した。各々のcDNAとはpDEST17ベクターを用いて大腸菌内に組み換え蛋白を発現させた。発現した蛋白を精製し、酵素活性の評価を行った。評価には同じく大腸菌に発現させたヒト・グリア線維性酸性蛋白質（GFAP）を用いた。精製PADとカルシウムイオンの共存下でシトルリン化を試みた。電気泳動により移動度の差が認められたのでシトルリン化がされていると判定した。この結果は組み換えPADが酵素活性を有することを示している。組み換えPAD分子をBALB/cマウスに免疫し、モノクローナル抗体を樹立した。その特異性の評価は各PADサブタイプの組み換え蛋白を抗原としたWestern Blottingにより実施した。樹立された複数のモノクローナル抗体のうちサブタイプ特異性を示すモノクローナル抗体を選択した。樹立したPAD4サブタイプに対するモノクローナル抗体を用いてPAD4濃度を測定するサンドイッチELISA法を確立した。今年度は通常のELISA法の確立に留まったが、末梢血中のPAD4の量を測定するには充分な感度を示した。同時にPAD4に対する自己抗体の検出システムも確立した。従来からPAD4に対する自己抗体の存在は知られていたが検出系の感度が不十分であったので診療に応用するには不向きであった。今回、我々は高感度の検出系を開発して、予備的にリウマチ患者血清を用いて評価を行った。その結果、リウマチ患者血清においてはPAD4に対する自己抗体が高率に出現することを確認した。今後の利用が期待される成果である。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
今年度の研究の目的の主眼はPADにかかわる測定系の開発であり、基本的に達成した。また確立した測定系が患者血清を用いての評価に耐えるものであったことから、当該年度の目的を達成したと考えている。より高感度の測定系には発展させなかったので今後、そのようなシステムが必要となれば次年度以降に検討したい。
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| Strategy for Future Research Activity |
今年度は確立した測定系を用いて広範な疾患について応用する、悪性腫瘍を中心に可能な限り網羅的に解析し、細胞内でのPADの病態生理学的意義を解析するための基礎資料としたい。
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| Expenditure Plans for the Next FY Research Funding |
研究を推進するために必要な機器・解析技術は整備されており、網羅的な疾患解析に必要な試薬・消耗品に充当する。
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[Journal Article] Shimada, S., Tanaka, Y., Waki, H., Kon, K., Iwamoto, M., Maruyama, N.: Analysis of brain cell activation by nanosized particles of Ginkgo biloba extract.2011
Author(s)
Shimada, S., Tanaka, Y., Waki, H., Kon, K., Iwamoto, M., Maruyama, N.
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Journal Title
International Journal of Plant Physiology and Biochemistry
Volume: 3
Pages: 28-33
Peer Reviewed
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[Journal Article] 17beta-Estradiol attenuates saturated fatty acid diet-induced liver injury in ovariectomized mice by up-regulating hepatic senescence marker protein-30.2011
Author(s)
Fukui, M., Senmaru, T., Hasegawa, G., Yamazaki, M., Asano, M., Kagami, Y., Ishigami, A., Maruyama, N., Iwasa, K., Kitawaki, J., Itoh, Y., Okanoue, T., Ohta, M., Obayashi, H., Nakamura, N.
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Journal Title
Biochem Biophys Res Commun
Volume: 415
Pages: 252-257
Peer Reviewed
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[Journal Article] Absorption and excretion of ascorbic acid alone and in acerola (Malpighia emarginata) juice: comparison in healthy Japanese subjects.2011
Author(s)
Uchida, E., Kondo, Y., Amano, A., Aizawa, S., Hanamura, T., Aoki, H., Nagamine, K., Koizumi, T., Maruyama, N., Ishigami, A.
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Journal Title
Biol Pharm Bull
Volume: 34
Pages: 1744-1747
Peer Reviewed
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[Journal Article] Establishment and characterization of hepatocytes from an Immortomouse/SMP30/GNL knockout mouse hybrid lacking vitamin C to study vitamin C transport.2011
Author(s)
Amano, A., Handa, S., Aigaki, T., Shigemoto, K., Maruyama, N., Ishigami, A.
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Journal Title
J Biochem
Volume: 150
Pages: 671-678
Peer Reviewed
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[Journal Article] Mitochondrial reactive oxygen species generation by the SDHC V69E mutation causes low birth weight and neonatal growth retardation.2011
Author(s)
Ishii, T., Miyazawa, M., Onodera, A., Yasuda, K., Kawabe, N., Kirinashizawa, M., Yoshimura, S., Maruyama, N., Hartman, P.S., Ishii, N.
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Journal Title
Mitochondrion
Volume: 11
Pages: 155-165
Peer Reviewed
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[Journal Article] Subcellular localization of peptidylarginine deiminase 2 and citrullinated proteins in brains of scrapie-infected mice: nuclear localization of PAD2 and membrane fraction-enriched citrullinated proteins.2011
Author(s)
Jang, B., Shin, H.Y., Choi, J.K., Nguyen du, P.T., Jeong, B.H., Ishigami, A., Maruyama, N., Carp, R.I., Kim, Y.S., Choi, E.K.
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Journal Title
J Neuropathol Exp Neurol
Volume: 70
Pages: 116-124
Peer Reviewed
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[Presentation] Evaluation of antioxidant activity of Olive Oil Potato Chips after oral administration in vitamin C-deficient SMP30/GNL knockout mice.2011
Author(s)
Sakuma,R., Kondo, Y., Ichisawa, M., Ishihara, K., Kubo, M., Ohashi, M., Handa, S., Mugita, H., Maruyama, N., Koga, H., Ishigami, A.
Organizer
International Society for Nutraceuticals and Functional Foods (ISNFF)
Place of Presentation
Sapporo
Year and Date
2011.11.14-17
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[Presentation] Effect of vitamin C deficiency on noradrenaline synthesis.2011
Author(s)
Amano, A., Tsunoda, M., Aigaki, T., Maruyama, N., Ishigami, A.
Organizer
The 9th Asia/Oceania Regional Congress of Gerontology
Place of Presentation
Melbourne, Australia,
Year and Date
2011.10.23-27
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