Ｃ型肝炎ウイルス持続感染の成立とＲＮＡ干渉の分子機構に関する基盤的研究

2013 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 23590555
• Research Institution: National Institute of Infectious Diseases
• Principal Investigator: 葛西 正孝 国立感染症研究所, その他部局等, 研究員 (10142134)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 深澤 征義 国立感染症研究所, その他部局等, その他 (20291130)
• Keywords: Translinタンパク質 / TRAXタンパク質

Research Abstract

本研究の最終目的は、C型肝炎ウイルス(hepatitis C virus, HCV)の持続感染成立に関わる分子機構の一端を明らかにすることである。申請者らが発見したDNA, RNA結合タンパク質であるTranslinおよびその類似タンパク質であるTRAXはTranslin/TRAX複合体を形成し、miRNA（siRNA）の取り込み・相補的RNAの切断に関わるRISC (RNA-induced silencing complex)の構成タンパク質となることが明らかにされ注目されている。そこで本研究では、RNAウイルスであるHCV持続感染において、Tarnslin/TRAXの関与するRNA干渉(RNAi)の役割に着目して検討を行うことを計画した。これまでに、1)TRAX分子単独では肝培養細胞内で存在できないこと、2)TRAXはtranslinと複合体を形成しており、単独ではプロテアソーム分解系によりタンパク質レベルで分解を受けること、3)様々なTRAX欠損変異体をを用い分解に重要な部位の検討を行った結果、TRAXのC末端領域が分解に重要であることがわかった。一方、TRAXはユビキチン化を受けるものの、C末領域のリジン残基すべてに変異を入れた場合でもプロテアソーム依存性の分解が見られたことから、ユビキチン非依存的に分解できることもわかった。この現象は,肝細胞以外の複数の細胞でも観察された。このことからTRAXはユビキチン非依存的なプロテアソーム分解の性状を解析するツールとして有望であると考えられた。
HCV感染が可能である複数のヒト肝培養細胞系を用いて、TRAX分子のsiRNAによるノックダウンを行いHCV感染･増殖を検討した結果、当初すべての場合で有意にHCV増殖抑制が見られたが、複数のsiRNAコンストラクトを検討した結果、TRAXの発現低下を示すものの有意なHCV増殖抑制が見られないものも存在した。また、TRAX/translinの共発現による効果も検討したが、HCV増殖に有意な変化は見られなかったため、今後さらに詳細な検討を加える予定である。

Research Products

• [Journal Article] Retinoids and rexinoids inhibit hepatitis C virus independently of retinoid receptor signaling (2014)
  • Author(s): Yuko Murakami, Masayoshi Fukasawa, Yukihiro Kaneko, Tetsuro Suzuki, TakajiWakita, Hidesuke Fukazawa
  • Journal Title: Microbes and Infection Volume: 16(2) Pages: 114-122
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Prominent Steatosis with Hypermetabolism of the Cell Line Permissive for Years of Infection with Hepatitis C Virus (2014)
  • Author(s): Kazuo Sugiyama, HirotoshiEbinuma, Nobuhiro Nakamoto, Noriko Sakasegawa, Yuko Murakami, Po-sung Chu, Shingo Usui, Yuka Ishibashi, Yuko Wakayama, NobuhitoTaniki, Hiroko Murata, Yoshimasa Saito, Masayoshi Fukasawa et al.
  • Journal Title: PLOS ONE Volume: 9(4) e94460 Pages: 1-18
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] RP58 regulates the multipolar-bipolar transition of newborn neurons in the developing cerebral cortex (2013)
  • Author(s): Ohtaka-Maruyama C, Hirai, S., Miwa, A., Heng, JI., Shitara, H., Ishii, R., Taya, C., Kawano, H., Kasai, M., Nakajima, K., and Okado, H.
  • Journal Title: Cell Reports Volume: 21 Pages: 458-471
• [Journal Article] A class II phosphoinositide 3-kinase plays an indispensable role in hepatitis C virus replication (2013)
  • Author(s): Maehama T, Fukasawa M, Date T, Wakita T, Hanada K.
  • Journal Title: Biochem.Biophys. Res.Commun. Volume: 440(1) Pages: 150-156
  • Peer Reviewed
• [Presentation] TRAXはユビキチン非依存的なプロテアソーム分解を受ける (2014)
  • Author(s): 白砂圭崇、葛西正孝、花田賢太郎、安部良、深澤征義
  • Organizer: 日本薬学会第１３４年会
  • Place of Presentation: 熊本
  • Year and Date: 20140327-20140330
• [Presentation] C型肝炎ウイルスへの感染感受性を欠損した宿主肝細胞変異株の分離と性状解析 (2013)
  • Author(s): 白砂圭崇、鈴木哲朗、脇田隆字、花田賢太郎、安部良、深澤征義
  • Organizer: 第86回日本生化学会大会
  • Place of Presentation: 横浜
  • Year and Date: 20130911-13
• [Presentation] The role of Translin/TRAX complex in mesenchymal differentiation programs (2013)
  • Author(s): Kasai, M., Ishida, R., Strominger, JL., and Asano, S.
  • Organizer: AsiaCORD2013: New Perspectives in Mesenchymal Stem Cell Research
  • Place of Presentation: 神戸
  • Year and Date: 20130419-20
  • Invited
• [Presentation] In vitro and in vivo inhibition of hepatitis C virus infection by mouse anti-human claudin 1 monoclonal antibodies (2012)
  • Author(s): Masayoshi Fukasawa, Shotaro Nagase, Mayo Yamashita, Kentaro Hanada, Akihiro Watari, Kiyohito Yagi, Masuo Kondoh
  • Organizer: The 2013 ASCB Annual Meeting
  • Place of Presentation: New Orleans, USA
  • Year and Date: 20121214-18