2013 Fiscal Year Annual Research Report
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23590556
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| Research Institution | National Institute of Infectious Diseases |
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Principal Investigator |
片山 和彦 国立感染症研究所, ウイルス第二部, 室長 (60342903)
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| Keywords | 病原性 / 細胞内動態 / 機能 |
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| Research Abstract |
リバースジェネティックスシステム（RGS）は、HuNoVのポリプロテイン翻訳から粒子形成に至る全ての行程を細胞内で再現できる。本研究では、HuNoVの病原性発現機構、抗ウイルス薬開発の基盤となるウイルス蛋白質の細胞内動態、機能解明を目指している。
（１）HuNoVのゲノムにはORF1, 2, 3が存在する。ORF1は6-7種類の非構造蛋白質コードされている。ORF2, 3には構造蛋白質VP1, VP2がコードされている。本年度は、VP2のラベルとリアルタイムイメージングを実現した。VP2は非常に発現量が低いが、感染初期から複製複合体と共にERとゴルジ体の間に泡状構造物の一部として観察された。トランスフェクション後8時間以降に、細胞全体に拡散する傾向が認められた。
（２）HuNoV ORF1にコードされるproteaseのGDCGモチーフをGDGGに変えたミュータントはprotease knock outになる。野生型とGDGGミュータントの細胞に対する影響を比較した。野生型は、細胞の小胞輸送システムに強いダメージを与え、細胞内タンパク質輸送がERとゴルジの間でスタックし、アポトーシスを誘導した。しかし、GDGGはORF1ポリプロテインがERと共局在しており、アポトーシスは誘導されなかった。
（３）昨年、構築に成功したMuNoVのRGSを用いて、VP2の細胞内動態を調べた。pKS-MuNoVのVP2にテトラシステインタグを導入し、感染性VP2ミュータントMuNoVを作出した。HEK293Tから産生された感染性VP2ミュータントMuNoVによりVP2の局在をTC-FlAsH で染色したところ、複製複合体との共局在が観察された。
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[Journal Article] Norovirus Binding to Intestinal Epithelial Cells Is Independent of Histo-Blood Group Antigens2013
Author(s)
Kosuke Murakami, Chie Kurihara, Tomoichiro Oka, Takashi Shimoike, Yoshiki Fujii, Reiko Takai Todaka, YoungBin Park, Takaji Wakita, Tsukasa Matsuda, Ryota Hokari, Soichiro Miura, Kazuhiko Katayama
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Journal Title
PLoS One
Volume: 14
Pages: e66534
DOI
Peer Reviewed
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[Presentation] A plasmid based reverse genetics system can drive human and murine norovirus genome replication and produce progeny virus containing reporter tagged infectious genomic RNA.2013
Author(s)
Kazuhiko Katayama1,2, Reiko Takai-Todaka2, Akira Nakanishi3, Kosuke Murakami1,2, Tomoichiro Oka2, Susana Guix1, Tyler M. Sharp1, Robert L. Atmar 1, Sue E. Crawford1, and Mary K. Estes1
Organizer
The Fifth International Calicivirus Conference
Place of Presentation
Beijing, China.
Year and Date
20131012-20131015
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[Presentation] Deep Sequencing-based analysis of minor variants in norovirus infection cases with acute gastroenteritis.2013
Author(s)
Motomura K, Ode H, Yokoyama M, Nakamura H, Sato A, Katayama K, Noda M, Takeda N, Tanaka T, Sato H and the Norovirus Surveillance Group of Japan.
Organizer
The Fifth International Calicivirus Conference
Place of Presentation
Beijing, China.
Year and Date
20131012-20131015
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[Presentation] Selective constraints on changes of a norovirus pandemic lineage GII.4_2006b.2013
Author(s)
Sato H, Yokoyama M, Motomura K, Nakamura H, Oka T, Katayama K, Takeda N, Noda M, Tanaka T, and the Norovirus Surveillance Group of Japan. Selective constraints on changes of a norovirus pandemic lineage GII.4_2006b.
Organizer
The Fifth International Calicivirus Conference
Place of Presentation
Beijing, China.
Year and Date
20131012-20131015
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