2012 Fiscal Year Research-status Report
造血器腫瘍におけるエピジェネティック薬剤効果検査マーカーの確立
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23590687
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| Research Institution | Kitasato University |
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Principal Investigator |
高橋 伸一郎 北里大学, 医療衛生学部, 教授 (40375069)
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| Keywords | エピジェネティック / バイオマーカー |
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| Research Abstract |
PU.1発現と5-azadc効果関連分子機構の解明：前年度にはPU.1を過剰発現した慢性骨髄性白血病(K562)細胞株(K562PU.1OEcells)を樹立し、PU.1発現と5-azadc効果について報告した(BBRC, 420(4), p775-781, 2012)。さらに、PU.1とメチル化阻害剤との関連を確証するために、現在、急性単球性白血病(THP-1)細胞株を用いて新たなPU.1過剰発現細胞株の樹立を試み、一部樹立に成功した。樹立された過剰発現株はやはり5-azadcに対し高感受性であった。現在さらに新たな株を作成し、その効果を検討中である。
PU.1発現低下に伴う標的遺伝子発現上昇意義の検討：PU.1下流標的遺伝子として独自に同定した、メタロチオネイン(MT)-1、ビメンチン（VIM）が、実際の骨髄球系細胞分化でも、PU.1によりエピジェネティックに制御されているか、THP-1細胞をフォルボールエステル（TPA）によりマクロファージに分化誘導する系を用いて検討を行った。その結果、MT-1は分化と共にその発現がPU.1と負に相関し、PU.1がメチル化CpG結合蛋白(MeCP)2と共にMT-1Aプロモーターに結合し、PU.1結合領域のプロモーターメチル化割合を上昇させることで、分化と共に本遺伝子発現を抑制していることを見出した(BBRC, 433(3), p349-353, 2013)。また、前年度迄に、MT-1の骨髄系細胞における役割を明らかにする為、MT-1過剰発現NB4細胞（NB4MTOEcells）を作製し、全トランス型レチノイン酸による分化が、NB4MTOE細胞にて抑制されていることを明らかにしている。今年度は、MT-1による分化阻害の機序として、MT-1過剰発現が、細胞増殖停止・分化制御に関わるp53の転写因子機能を阻害する機序を見出した（投稿中）。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
PU.1下流標的遺伝子として独自に同定した、メタロチオネイン(MT)-1、ビメンチン（VIM）が、骨髄球系細胞分化でも、PU.1によりエピジェネティックに制御されているか検討を行った。VIMにおいて関連は認められなかったものの、MT-1に関しては、やはりPU.1が骨髄球系細胞分化において、DNAメチル化活性、ヒストン脱アセチル化活性により制御していることが判明した(BBRC, 433(3), p349-353, 2013)。独自に同定したPU.1-MT-1経路が、骨髄球系細胞分化の過程において、実際制御されているということを明らかにしたのは重要である。
臨床検体解析に関しては症例の集積が進まず、検体に対する5-azadcの効果は検討不可能である。また、臨床検体からのゲノムメチル化解析では、集積された症例が少ないため現在3例しか検討していないが、MT-1発現とMT-1メチル化との間にこの少ない症例では関連が認められなかった。すなわち、メチル化解析ではなく、PU.1またはMT-1発現解析が薬効効果予測に重要である可能性が示唆された。
また、MT-1による骨髄球系分化阻害を明らかにし、その機序としてp53の機能阻害を引き起こしていることを見出した（論文投稿中）。
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| Strategy for Future Research Activity |
慢性骨髄性白血病(K562)細胞株、急性単球性白血病(THP-1)細胞株等にMT-1過剰発現プラスミドを導入し、MT-1過剰発現細胞株を作成し、5-azadcとの効果関連の検討を行う。また、MT-1の分化・増殖における役割に関してもさらなる解析を進める。また、PU.1過剰発現細胞に関しても、樹立を進め、5-azadcとの効果関連の検討を行う
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| Expenditure Plans for the Next FY Research Funding |
分子生物学的実験試薬（cDNA合成キット、定量PCR試薬、細胞増殖アッセイキット、抗体等）：30万円
細胞培養試薬（血清、培地、他消耗品）：10万円
プラスチック器具：10万円
研究補助員人件費：50万円
国内学会発表旅費：5万円
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Research Products
(8 results)
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[Presentation] Analysis of Fcg receptor 2A, 2B and 3A polymorphisms in adults with immune thrombocytopenia
Author(s)
Satoh T, Shimohira A, Amano N, Okazaki Y, Nishimoto T, Akahoshi T, Munekata S, Knoh Y, Okada J, Ikeda Y, Miyazaki K, Higashihara M, Kuwana M and Takahashi S
Organizer
日本血液学会
Place of Presentation
京都
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