2011 Fiscal Year Research-status Report
アダプター蛋白質Ｇａｂ１をターゲットとした新規肝癌分子標的治療法の開発
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23590974
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| Research Institution | Osaka University |
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Principal Investigator |
吉田 雄一 大阪大学, 医学(系)研究科(研究院), 助教 (30457014)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
木曽 真一 大阪大学, 医学(系)研究科(研究院), 助教 (40335352)
渡部 健二 大阪大学, 医学(系)研究科(研究院), 助教 (50379244)
筒井 秀作 大阪大学, 医学(系)研究科(研究院), 助教 (10359846)
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| Project Period (FY) |
2011-04-28 – 2014-03-31
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| Keywords | Gab1 / シグナル伝達 / MAP kinase / 肝細胞癌 / 分子標的治療 |
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| Research Abstract |
【背景及び目的】私共はこれまで様々な受容体型チロシンキナーゼの下流で機能するアダプター蛋白Grb2-associated binder 1（Gab1）を同定し、その生理学的な意義について検討してきた。そこで、今回の検討では、ヒト肝細胞癌におけるGab1の関与ならびに、同分子の肝細胞癌治療の標的分子としての可能性について検討した。【方法】１）アデノウイルス過剰発現系を用い、Gab1過剰発現がヒト肝癌細胞株の細胞増殖及び足場非依存性細胞増殖に与える影響について評価した。２）Gab1過剰発現あるいはsiRNAノックダウンがヒト肝癌細胞の増殖シグナル（ERK及びAKT）に与える影響について評価した。３）Gab1ノックダウンヒト肝癌細胞株をヌードマウス皮下に移植し、Gab1発現抑制がin vivoの 腫瘍増殖に与える影響について検討した。【結果】１）Gab1過剰発現は、肝癌細胞株の細胞増殖及び足場非依存性細胞増殖を有意に増加させた。(p<0.001)また、SHP-2結合部位やPI3 kinase 結合部位に変異を施したアデノウイルス感染細胞では、スフェロイドコロニー形成が有意に抑制された。(p<0.001)２）Gab1過剰発現はHB-EGF依存性の増殖シグナル（ERK1/2及びAKT1）を増強させ、逆にノックダウンは増殖シグナルを抑制した。３）Gab1ノックダウン肝癌細胞株(KD)は、対照細胞株（Control）に比し、ヌードマウスにおける皮下腫瘍形成能が有意に低下していた。（移植後15日目腫瘍重量：0.23±0.10g (KD) vs 1.09±0.45g (control)；p<0.01）【考察】Gab1は、ERK及びAKTシグナルを介して、ヒト肝癌細胞の増殖・癌化能を制御している可能性が示唆された。【結語】Gab1は、ヒト肝細胞癌治療の新規分子標的になる可能性が示唆された。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
今回の検討では、ヒト肝癌細胞株の増殖におけるGab1の役割について、in vitro 及び in vivo において検討を行った。この結果、１）Gab1は、ヒト肝癌細胞株の細胞増殖及び足場非依存性細胞増殖を正に制御していること ２）この制御には、Gab1を介した、MAP kinase ERKや、AKTを介したシグナルが重要な役割を果たしていること ３）Gab1は、in vivo において、ヌードマウス皮下腫瘍モデルにおけるヒト肝癌細胞株の腫瘍増殖を正に制御していること を明らかにしてきた。これらの検討により、少なくともヒト肝癌細胞株において、Gab1は、その腫瘍増殖を正に制御していることが明らかにすることができた。従って、当初の研究目的は、概ね順調に進展していると考えられる。
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| Strategy for Future Research Activity |
私共は、これまでGab1欠損マウスが、心臓、胎盤、皮膚等の発生段階における異常により、胎生致死になることを明らかにしている。そこで、臓器特異的Cre-LoxPシステムを用いて、肝臓特異的にGab1を欠損させてマウスの作製を行い、本マウスの樹立に成功している。一方で、ヒト肝細胞癌の発生・進展過程においては、肝障害・炎症・再生・線維化等のいくつかのステップが関与している。そこで、この複雑なステップにおけるGab1の関与を明らかにするために、肝臓特異的Gab1欠損マウスを用いて、それぞれの過程における同分子の役割について検討を行う予定である。
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| Expenditure Plans for the Next FY Research Funding |
今後の研究費の使用計画としては、マウスを用いた検討がメインになると考えられるため、マウス組織の解析に必要な、遺伝子解析（定量的real time RT-PCR法を用いた）や、ウエスタンブロット、免疫組織学解析（抗体等）に関する試薬購入にあてる予定である。
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[Journal Article] Estrogen deficiency worsens steatohepatitis in mice fed high-fat and high-cholesterol diet.2011
Author(s)
Kamada Y, Kiso S, Yoshida Y, Chatani N, Kizu T, Hamano M, Tsubakio M, Takemura T, Ezaki H, Hayashi N, Takehara T
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Journal Title
Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol.
Volume: 301
Pages: 1031, 1043
DOI
Peer Reviewed
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[Presentation] Pitavastatin administration ameliorated the progression of steatohepatitis in ovariectomized mice fed with high fat and high cholesterol diet
Author(s)
Kamada Y, Kiso S, Yoshida Y, Chatani N, Kizu T Hamano M, Tsubakio M, Takemura T, Ezaki H, Hayashi N, Tetsuo Takehara
Organizer
62nd Annual Meeting of the America Association for the Study of Liver Diseases
Place of Presentation
Moscone West Convention Center, San Francisco, USA
Year and Date
平成23年11月７日
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[Presentation] Protective role of heparin-binding EGF-like growth factor during liver fibrosis in mice
Author(s)
Takemura T, Yoshida Y, Kizu T, Furuta K, Kamada Y, Hamano M, Tsubakio M, Chatani N, Ezakki H, Kiso S, Takehara T
Organizer
62nd Annual Meeting of the America Association for the Study of Liver Diseases
Place of Presentation
Moscone West Convention Center, San Francisco, USA
Year and Date
平成23年11月6日
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[Presentation] Gab1 scaffolding adaptor protein protects from liver fibrosis during chronic liver injury in mice
Author(s)
Kizu T, Yoshida Y, Takemura T, Furuta K, Kamada Y, Chatani N, Hamano M, Tsubakio M, Ezaki H, Kiso S, Takehara T
Organizer
62nd Annual Meeting of the America Association for the Study of Liver Diseases
Place of Presentation
Moscone West Convention Center, San Francisco, USA
Year and Date
平成23年11月6日
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