2011 Fiscal Year Research-status Report
肝癌におけるＮｏｔｃｈシグナルをターゲットとした新規腫瘍血管新生抑制療法の開発
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23590975
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| Research Institution | Okayama University |
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Principal Investigator |
白羽 英則 岡山大学, 大学病院, 講師 (40379748)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
大西 秀樹 岡山大学, 医歯(薬)学総合研究科, 助教 (30595468)
中村 進一郎 岡山大学, 大学病院, 助教 (70514230)
能祖 一裕 岡山大学, 医歯(薬)学総合研究科, 准教授 (10314668)
山本 和秀 岡山大学, 医歯(薬)学総合研究科, 教授 (90140491)
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| Project Period (FY) |
2011-04-28 – 2014-03-31
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| Keywords | 肝細胞癌 / Notchシグナル / 血管新生 / RUNX3 |
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| Research Abstract |
平成23年度は、肝細胞癌におけるRUNX3の発現とNotchシグナルの関連について検討を行った。肝細胞癌cell line HepG2, Hep3B, Huh1, JHH1, JHH2, JHH4, HLE, HLF, PLC, SK-Hep1においてRUNX3のmRNAと蛋白発現をRT-PCRとWesternでそれぞれ検討した。肝細胞癌cell line HepG2, Hep3B, Huh1, JHH1, JHH2, JHH4では、RUNX3の発現は消失、HLE, HLFではごく軽度の発現、PLC, SK-Hep1では発現が確認された。多くのcell lineにおいてRUNX3の発現は低下または消失していた。肝癌組織においても、免疫組織染色を行い、RUNX3の蛋白発現は、半数以上の肝癌組織において低下していた。HCCにおけるNotchシグナルは、Hep3B, Huh7において検討し、いずれの細胞でも、HES1, Hey1を介していた。このシグナル活性化は、γセクレターゼインヒビターによって阻害できる事も確認した。RUNX3のcDNAとsiRNAのクローニングも終了し、RUNX3 cDNAの細胞への導入を行うと、Notchシグナルの低下,HES1,Hey1へのシグナルの低下がおこる事も確認した。また、RUNX3 siRNAを肝癌細胞へ導入し、RUNX3のｍRNA、蛋白発現がノックダウンされることも確認できた。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
肝細胞癌における、RUNX3の発現解析、Notchシグナルの解析がほぼ終了している。また、ＲＵＮＸ３の発現をコントロールするＲＵＮＸ３のcDNA, siRNAのクローニングが終了しており、ＲＵＮＸ３の発現コントロールができるようになった。ＲＵＮＸ３と血管新生をつなぐシグナルがNotchであることを確認し、Ｎｏｔｃｈシグナルの下流はHES, Heyであることも確認された。これらシグナルが、γセクレターゼインヒビターで抑制できることも確認できた。
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| Strategy for Future Research Activity |
引き続き研究をすすめる。血管新生を誘導するＮｏｔｃｈシグナル制御機構の解明を進める。臨床検体におけるＲＵＮＸ３発現やNotchシグナルの活性化機構の解析も進めていく。【Notchシグナルをターゲットとした血管新生抑制療法】のin vivoでの検証を行う。DCP産生肝癌cell line (Hep3B, PLC, Hep3B-Δ2GGCX)、非産生肝癌cell line (HLE, SK-Hep1, Hep3B-WTGGCX)をSCIDマウス腹腔内及び皮下に接種し、2, 4, 6, 8週で剖検し、腫瘍系、重量より腫瘍の進展を評価する。血管新生は、CD31, エンドセリン抗体による免疫染色で評価する。Notchシグナル活性化も検討する。上記モデルにDCPmabを腫瘍接種後2週より週に一度マウス尾静脈より投与する。投与量は、ベツキシマブ血中濃度(約100μg/ml)とマウス血液量（約3ml；体重25g）より算出し、100, 300, 500μgでの検討よりスタートする。検討3での検討結果と予備実験結果より抗体濃度の再検証を行い、同様の実験を繰り返す。Notchシグナルを阻害するγ-セクレターゼ阻害剤(Merck 565765)は、腹腔内投与し、DCPmabと血管新生抑制効果を同様に比較する。
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| Expenditure Plans for the Next FY Research Funding |
研究費は、その大部分を消耗品で使用する。その内容は、実験試薬、培養器具、実験動物で使用する。その他研究遂行に必要な物品の購入にあてる。研究成果の発表のための英語論文の英文校正や、論文受理の際には、出版費用にも使用する。
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[Journal Article] Predicting the treatment effect of sorafenib using serum angiogenesis markers in patients with hepatocellular carcinoma.2011
Author(s)
Miyahara K, Nouso K, Tomoda T, Kobayashi S, Hagihara H, Kuwaki K, Toshimori J, Onishi H, Ikeda F, Miyake Y, Nakamura S, Shiraha H, Takaki A, Yamamoto K.
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Journal Title
J Gastroenterol Hepatol.
Volume: 26(11)
Pages: 1604-11
DOI
Peer Reviewed
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[Journal Article] Restored expression of the tumor suppressor gene RUNX3 reduces cancer stem cells in hepatocellular carcinoma by suppressing Jagged1-Notch signaling.2011
Author(s)
Nishina S, Shiraha H, Nakanishi Y, Tanaka S, Matsubara M, Takaoka N, Uemura M, Horiguchi S, Kataoka J, Iwamuro M, Yagi T, Yamamoto K.
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Journal Title
Oncol Rep.
Volume: 26(3)
Pages: 523-31
DOI
Peer Reviewed
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[Journal Article] Serum hepatitis B virus DNA before liver transplantation correlates with HBV reinfection rate even under successful low-dose hepatitis B immunoglobulin prophylaxis.2011
Author(s)
Yasunaka T, Takaki A, Yagi T, Iwasaki Y, Sadamori H, Koike K, Hirohata S, Tatsukawa M, Kawai D, Shiraha H, Miyake Y, Ikeda F, Kobashi H, Matsuda H, et. al.
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Journal Title
Hepatol Int.
Volume: in press
Pages: in press
Peer Reviewed
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[Journal Article] Prognostic importance of fucosylated alpha-fetoprotein in hepatocellular carcinoma patients with low alpha-fetoprotein.2011
Author(s)
Nouso K, Kobayashi Y, Nakamura S, Kobayashi S, Takayama H, Toshimori J, Kuwaki K, Hagihara H, Onishi H, Miyake Y, Ikeda F, Shiraha H, Takaki A, Iwasaki Y, Kobashi H, Yamamoto K.
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Journal Title
J Gastroenterol Hepatol.
Volume: 26(7)
Pages: 1195-200
DOI
Peer Reviewed
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[Presentation] 非アルコール性脂肪性肝炎(NASH)モデルマウスの病態進行に対する水素水の効果の検討
Author(s)
河合大介, 高木章乃夫, 松本和幸, 津崎龍一郎, 安中哲也, 中司敦子, 小池和子, 三宅康広, 白羽英則, 和田淳, 山本和秀
Organizer
第47回日本肝臓学会総会
Place of Presentation
東京
Year and Date
平成23年6月2日
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[Presentation] 肝細胞癌におけるepithelial-mesenchymal transition制御
Author(s)
白羽英則, 仁科慎一, 堀口繁, 片岡淳朗, 岩室雅也, 松原稔, 高岡伸行, 高木章乃夫, 大西秀樹, 中村進一郎, 能祖一裕, 山本和秀
Organizer
第70回日本癌学会学術総会
Place of Presentation
名古屋
Year and Date
平成23年10月4日
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[Presentation] 肝細胞癌におけるPIVKA-II産生とEpithelial-Mesenchymal Transition
Author(s)
白羽英則, 松原稔, 堀口繁, 岩室雅也, 片岡淳朗, 永原照也, 高木章乃夫, 萩原宏明, 桑木健志, 大西秀樹, 中村進一郎, 能祖一裕, 山本和秀
Organizer
JDDW2011
Place of Presentation
福岡
Year and Date
平成23年10月21日
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[Presentation] 血管新生関連サイトカインによる進行肝細胞癌の治療効果予測
Author(s)
宮原孝治, 能祖一裕, 衣笠秀明, 竹内康人, 友田健, 小林沙代, 萩原宏明, 安中哲也, 桑木健志, 大西秀樹, 池田房雄, 三宅康広, 中村進一郎, 白羽英則, 高木章乃夫, 山本和秀
Organizer
JDDW2011
Place of Presentation
福岡
Year and Date
平成23年10月21日
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[Presentation] 本学関連病院における急性B型肝炎の実態調査
Author(s)
安中哲也, 池田房雄, 三宅康広, 白羽英則, 高木章乃夫, 小橋春彦, 藤岡真一, 岡本良一, 狩山和也, 高山裕基, 宮武宏和, 守屋昭男, 高口浩一, 辰川匡史 他
Organizer
JDDW2011
Place of Presentation
福岡
Year and Date
平成23年10月21日
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[Presentation] 核酸アナログ併用下、低用量HBIG・ワクチンによるB型肝炎ウイルスコントロール
Author(s)
高木章乃夫, 八木孝仁, 貞森裕, 松田浩明, 安中哲也, 篠浦先, 楳田祐三, 吉田龍一, 内海方嗣, 小池和子, 池田房雄, 三宅康広, 白羽英則, 保田裕子, 藤原俊義, 山本和秀
Organizer
第46回日本移植学会総会
Place of Presentation
京都
Year and Date
平成23年10月20日
