膵癌に対するＧｅｍｃｉｔａｂｉｎｅの作用発現におけるＨＳＰ２７の役割

2011 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 23591013
• Research Institution: Gifu University
• Principal Investigator: 安田 一朗 岐阜大学, 医学部附属病院, 講師 (00377673)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 小澤 修 岐阜大学, 医学(系)研究科(研究院), 教授 (90225417) ; 足立 政治 岐阜大学, 医学(系)研究科(研究院), 非常勤講師 (50467205)
• Project Period (FY): 2011-04-28 – 2014-03-31
• Keywords: 膵癌 / Gemcitabine / HSP27 / EUS-FNA / リン酸化

Research Abstract

我々は、膵癌における低分子量ストレスタンパク質heat shock protein (HSP)27の役割に着目し、超音波内視鏡(EUS)ガイド下吸引針生検(EUS-FNA)により得られた膵癌組織を用いて、HSP27およびリン酸化型HSP27の発現量と臨床効果・予後との関係を検討することでHSP27による予後予測を目指している。平成23年度は病理組織における総HSP27およびリン酸化型HSP27の発現の解析を行った。今までに当施設において化学療法前確定診断を目的にEUS-FNAによる病理組織採取を行った膵癌症例のうち、Gemcitabineによる化学療法を施行し、予後が明らかな症例150例を対象とし、この中でGEM奏効群と無効群について、病理組織におけるHSP27およびリン酸化型の発現様式を免疫組織染色にて比較検討した。その結果リン酸化型HSP27の発現の高い症例ではGEMに対し無効であるが傾向が得られた。現在その詳細について症例数を増やし検討中である。さらに変異HSP27プラスミドの作成とその機能解析を行った。HSP27の15、78、82番目のセリン残基をアラニンに置換した恒常的非リン酸化型HSP27(3A)、およびアスパラギンに置換した恒常的リン酸化型の変異HSP27(3D)を作成し、膵癌細胞に遺伝子導入し細胞の増殖能・転移能の違いや細胞内情報伝達に関わる因子への影響について検討した。その結果、control (empty) とwild type (WT)の間に細胞増殖能に有意な差を認めなかったものの、3Aは3Dに対し細胞増殖能の亢進を認めた。またGEMに対する反応についてはemptyとWTの間に有意な差は認めなかった。現在3Aと３Dの間でGEMに対する反応に違いがないか検討中である。さらにこれらに違いがある場合に分子生物学的な解析を行う予定である。

Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

平成23年度に予定していた計画についておおむね順調に進んでいる。「病理組織における総HSP27およびリン酸化型HSP27の発現の解析」EUS-FNAを用いてHSP27およびリン酸型HSP27の発現量を組織染色にて計測したが、至適な条件設定を見出すのにやや難渋したことと、予想より検体量が微小である症例が多く、結果的に症例数が減少してしまっているため、今後追加で組織染色を行う必要がある。「変異HSP27プラスミドの作成とその機能解析および膵癌由来細胞におけるGemcitabine投与によるHSP27およびリン酸化型HSP27の変化の検討」変異HSP27プラスミドの作成および恒常的膵癌細胞株は樹立できた。またそれぞれ細胞株について細胞増殖能、GEM投与による殺細胞効果の検討は終了しており、おおむね順調である。今後は以下にあげるような項目について詳細な検討を行う予定である。

Strategy for Future Research Activity

「変異HSP27のstable transformant cell lineを用いたリン酸化型HSP27の機能解析」Panc1細胞に変異型HSP27の遺伝子を恒常的に導入したstable transformant cell lineを用い、細胞増殖やアポトーシスなどの細胞機能の変化をMTT assay・immunoblot法・ウェスタンブロット法で検討、変異HSP27によるVEGF産生の変化について検討、その他の転移能のマーカー(MMP,　t-PAなど)についても検討、各種抗がん剤による殺細胞効果における変異HSP27の影響をMTT assay, immunoblot法あるいはRT/PCR法で検討、 リン酸化型および非リン酸化型HSP27の免疫蛍光染色を行い、Gemcitabine投与によるそれぞれの局在の変化をWild type(WT)と比較検討する。「変異HSP27のトランスジェニックマウスの作成」これらの変異HSP27プラスミドを用いて、トランスジェニックマウスの作成を行い、in vivoでの解析を進める。当大学は隣接して動物実験施設を保有しており、またトランスジェニックマウスの手技的経験を有している研究者がおり、的確なアドバイスのもとただちに動物実験が取りかかることのできる環境にある。

Expenditure Plans for the Next FY Research Funding

上記に挙げた方策に対し、必要な試薬・機器の購入に充てる。具体的にはMTT assay試薬、免疫染色に必要な蛍光標識抗体、蛍光顕微鏡の使用代、ウェスタンブロットに必要な諸経費などである。また細胞株維持に必要なクリーンベンチおよびその周辺試薬が一定量必要である。症例数の一層の積み重ねが必要であることから薄切標本の作製、免疫染色に必要な試薬一般が追加で必要である。また今後の方向性についての見聞を深めるために関係学会への参加も予定しているため交通費などが必要である。

Research Products

• [Journal Article] Endoscopic ultrasound-guided fine needle aspiration biopsy for diagnosis of lymphoproliferative disorders: Feasibility of immunohistological, flow cytometric, and cytogenetic assessments. (2012)
  • Author(s): Yasuda I, Goto N, Tsurumi H, Nakashima M, Doi S, Iwashita T, Kanemura N, Kasahara S, Adachi S, Hara T, Shimizu M, Takami T, Moriwaki H.
  • Journal Title: Am J Gastroenterol Volume: 107 Pages: 397-404
  • DOI: doi: 10.1038/ajg.2011.350.
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] UVC irradiation suppresses platelet-derived growth factor-BB-induced migration in human pancreatic cancer cells. (2012)
  • Author(s): Kawaguchi J, Adachi S, Yasuda I, Yamauchi T, Yoshioka T, Itani M, Kozawa O, Moriwaki H.
  • Journal Title: Oncol Rep Volume: 27 Pages: 935-939
  • DOI: doi: 10.3892/or.2011.1612.
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Use of Samples from Endoscopic, Ultrasound-Guided, 19-Gauge, Fine-Needle Aspiration in Diagnosis of Autoimmune Pancreatitis. (2012)
  • Author(s): Iwashita T, Yasuda I, Doi S, Ando N, Nakashima M, Adachi S, Hirose Y, Mukai T, Iwata K, Tomita E, Itoi T, Moriwaki H.
  • Journal Title: Clin Gastroenterol Hepatol Volume: 10 Pages: 316-322
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Predictive factors for pain relief after endoscopic ultrasound-guided celiac plexus neurolysis (2011)
  • Author(s): Iwata K, Yasuda I, et al.
  • Journal Title: Dig Endosc Volume: 23 Pages: 140-145
• [Journal Article] Rho-kinase inhibitor upregulates migration by altering focal adhesion formation via the Akt pathway in colon cancer cells. (2011)
  • Author(s): Adachi S, Yasuda I, Nakashima M, Yamauchi T, Yoshioka T, Okano Y, Moriwaki H, Kozawa O.
  • Journal Title: Eur J Pharmacol Volume: 650 Pages: 145-150
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] EUS-FNA of Lesions near the Aortoiliac Bifurcation via an Upper Gastrointestinal Approach. (2011)
  • Author(s): Doi S, Yasuda I, Nakashima M, Kawaguchi J, Yamauchi T, Iwashita T, Toda K, Adachi S, Shimizu M, Tsurumi H, Moriwaki H
  • Journal Title: J Gastroenterol Hepatol Volume: 26 Pages: 1717-1720
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Inhibition of Rho-associated coiled-coil containing protein kinase enhances the activation of epidermal growth factor receptor in pancreatic cancer cells. (2011)
  • Author(s): Nakashima M, Adachi S, Yasuda I, Yamauchi T, Kawaguchi J, Hanamatsu T, Yoshioka T, Okano Y, Hirose Y, Kozawa O, Moriwaki H.
  • Journal Title: Mol Cancer Volume: 10 Pages: 79
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] UV-C irradiation induces downregulation of EGF receptor via phosphorylation at serine 1046/1047 in human pancreatic cancer cells. (2011)
  • Author(s): Yamauchi T, Adachi S, Yasuda I, Nakashima M, Kawaguchi J, Nishii Y, Yoshioka T, Okano Y, Hirose Y, Kozawa O, Moriwaki H.
  • Journal Title: Radiation Res Volume: 176 Pages: 565-574
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Ultraviolet irradiation can induce evasion of colon cancer cells from stimulation of epidermal growth factor. (2011)
  • Author(s): Adachi S, Yasuda I, Nakashima M, Yamauchi T, Kawaguchi J, Shimizu M, Itani M, Nakamura M, Nishii Y, Yoshioka T, Hirose Y, Okano Y, Moriwaki H, Kozawa O.
  • Journal Title: J Biol Chem Volume: 286 Pages: 26178-26187
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Ultra-violet irradiation induces apoptosis via mitochondrial pathway in pancreatic cancer cells. (2011)
  • Author(s): Yamauchi T, Adachi S, Yasuda I, Nakashima M, Kawaguchi J, Yoshioka T, Hirose Y, Kozawa O, Moriwaki H.
  • Journal Title: Int J Oncol Volume: 39 Pages: 1375-1380
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Ultraviolet enhances the sensitivity of pancreatic cancer cells to gemcitabine by activation of 5' AMP-activated protein kinase (2011)
  • Author(s): Adachi S, Yasuda I, Kawaguchi J, Yamauchi T, Nakashima M, Itani M, Nakamura M, Yoshioka T, Moriwaki H, Kozawa O
  • Journal Title: Biochem Biophys Res Commun Volume: 414 Pages: 53-59
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Phosphorylation status of heat shock protein 27 plays a key role in gemcitabine-induced apoptosis of pancreatic cancer cells. (2011)
  • Author(s): Nakashima M, Adachi S, Yasuda I, Yamauchi T, Kawaguchi J, Itani M, Yoshioka T, Matsushima-Nishiwaki R, Hirose Y, Kozawa O, Moriwaki H.
  • Journal Title: Cancer Lett Volume: 313 Pages: 218-225
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Role of EUS in early detection of small pancreatic cancer. (2011)
  • Author(s): Yasuda I, Iwashita T, Doi S, Nakashima M, Moriwaki H.
  • Journal Title: Dig Endosc Volume: 23 Pages: 22-25
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Cholangioscopic view of IgG4-related sclerosing cholangitis. (2011)
  • Author(s): Yasuda I, Nakashima M, Moriwaki H.
  • Journal Title: J Hepatobiliary Pancreat Volume: 18 Pages: 122-124
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Comparison of axial force and cell width of self-expandable metallic stents: which type of stent is better suited for hilar biliary strictures? (2011)
  • Author(s): Mukai T, Yasuda I, Isayama H, Nakashima M, Doi S, Iwashita T, Iwata K, Kato T, Tomita E, Moriwaki H.
  • Journal Title: J Hepatobiliary Pancreat Volume: 18 Pages: 646-652
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] EUS-FNA for suspected malignant biliary strictures after negative endoscopic transpapillary brush cytology and forceps biopsy. (2011)
  • Author(s): Ohshima Y, Yasuda I, Kawakami H, Kuwatani M, Mukai T, Iwashita T, Doi S, Nakashima M, Hirose Y, Asaka M, Moriwaki H.
  • Journal Title: J Gastroenterol Volume: 46 Pages: 921-928
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Serum interleukin-18 level is associated with the outcome of patients with diffuse large B-cell lymphoma treated with CHOP or R-CHOP regimens. (2011)
  • Author(s): Goto N, Tsurumi H, Kasahara S, Kanemura N, Hara T, Yasuda I, Shimizu M, Murakami N, Sawada M, Yamada T, Takemura M, Seishima M, Kito Y, Takami T, Moriwaki H.
  • Journal Title: Eur J Haematol Volume: 87 Pages: 217-227
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Endoscopic ultrasound-guided fine-needle aspiration of lesions near the aortoiliac bifurcation via an upper gastrointestinal approach. (2011)
  • Author(s): Doi S, Yasuda I, Nakashima M, Kawaguchi J, Yamauchi T, Iwashita T, Toda K, Adachi S, Shimizu M, Tsurumi H, Moriwaki H.
  • Journal Title: J Gastroenterol Hepatol Volume: 26 Pages: 1717-1720
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Combined endobronchial and endoscopic ultrasound-guided fine needle aspiration for mediastinal nodal staging of lung cancer. (2011)
  • Author(s): Ohnishi R, Yasuda I, Kato T, Tanaka T, Kaneko Y, Suzuki T, Yasuda S, Sano K, Doi S, Nakashima M, Hara T, Tsurumi H, Murakami N, Moriwaki H.
  • Journal Title: Endoscopy Volume: 43 Pages: 1082-1089
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Combined adenomatoid tumor and well differentiated papillary mesothelioma of the omentum. (2011)
  • Author(s): Hatano Y, Hirose Y, Matsunaga K, Kito Y, Yasuda I, Moriwaki H, Osada S, Yoshida K, Hara A.
  • Journal Title: Pathology International Volume: 61 Pages: 681-685
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Results of a Japanese multicenter randomized trial of endoscopic stenting for non-resectable pancreatic head cancer (JM-TEST): Covered Wallstent versus Double layer stent. (2011)
  • Author(s): Isayama H, Yasuda I, Ryozawa S, Maguchi H, Igarashi Y, Matsuyama Y, Katanuma A, Hasebe O, Irisawa A, Itoi T, Mukai H, Arisaka Y, Okushima K, Uno K, Kida M, Tamada K.
  • Journal Title: Dig Endosc Volume: 23 Pages: 310-315
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Endoscopic hemostasis using covered metallic stent placement for uncontrolled post-endoscopic sphincterotomy bleeding. (2011)
  • Author(s): Itoi T, Yasuda I, Doi S, Mukai T, Kurihara T, Sofuni A.
  • Journal Title: Endoscopy Volume: 43 Pages: 369-372
  • Peer Reviewed
• [Presentation] VTR Symposium 3「Latest advances of Interventional EUS」 EUS-CPN and EUS-CGN for pancreatobiliary cancer pain (2011)
  • Author(s): Doi S, Yasuda I, Moriwaki H
  • Organizer: 第81回日本消化器内視鏡学会総会
  • Place of Presentation: 名古屋
  • Year and Date: 2011年8月18日
• [Presentation] シンポジウム1-5「新規診断技術の有効性評価：得られたエビデンスと今後の展望 5. EUS-FNA」 リンパ腫診断におけるEUS-FNA (2011)
  • Author(s): 安田一朗、高見 剛、森脇久隆
  • Organizer: 第81回日本消化器内視鏡学会総会
  • Place of Presentation: 名古屋
  • Year and Date: 2011年8月17日
• [Presentation] Clinical impact of endoscopic ultrasound-guided fine needle aspiration biopsy in the diagnosis of lymphoma. (2011)
  • Author(s): Yasuda I, Goto N, Tsurumi H, Adachi S, Iwashita T, Toda K, Doi S, Yamauchi T, Nakashima M, Kawaguchi J, Takami T, Moriwaki H.
  • Organizer: Digestive Disease Week (DDW) 2011
  • Place of Presentation: Chicago
  • Year and Date: 2011年5月7日
• [Presentation] Endoscopic ultrasound-guided core needle biopsy for diagnosis of lymphoma: feasibility of immunophenotypic and cytogenetic assessments. (2011)
  • Author(s): Yasuda I, Goto N, Tsurumi H, Nakashima M, Doi S, Iwashita T, Takami T, Moriwaki H.
  • Organizer: Asian Pacific Digestive Disease Week 2011(APDW 2011)
  • Place of Presentation: Singapore
  • Year and Date: 2011年10月3日
• [Presentation] パネルディスカッション7 「EUS-FNA関連の手技と工夫（ビデオ）」 Convex型EUSによる腹腔神経節描出のコツと腹腔神経節ブロックの治療成績 (2011)
  • Author(s): 土井晋平、安田一朗、森脇久隆
  • Organizer: JDDW2010（第53回日本消化器病学会大会・第82回日本消化器内視鏡学会総会・第9回日本消化器外科学会合同）
  • Place of Presentation: 福岡
  • Year and Date: 2011年10月21日
• [Book] ＥＵＳ下穿刺術―Interventional EUSの基礎と実践テクニック (2011)
  • Author(s): 安田一朗．
  • Total Pages: 236
  • Publisher: 南江堂
• [Book] 消化器BOOK 05『症状・画像から見抜く！膵胆道系の鑑別診断』 (2011)
  • Author(s): 安田一朗．
  • Total Pages: 227
  • Publisher: 羊土社