2011 Fiscal Year Research-status Report
喫煙による血管障害におけるニコチン依存度とトロンボスポンジンの関与と機序
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23591056
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| Research Institution | Osaka City University |
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Principal Investigator |
竹本 恭彦 大阪市立大学, 医学(系)研究科(研究院), その他 (20364002)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
葭山 稔 大阪市立大学, 医学(系)研究科(研究院), 教授 (30240956)
廣橋 一裕 大阪市立大学, 医学(系)研究科(研究院), 教授 (00145799)
東 純一 兵庫医療大学, 薬学部, 教授 (30144463)
藤尾 慈 大阪大学, 薬学研究科(研究院), 教授 (20359839)
前田 真貴子 兵庫医療大学, 薬学部, 講師 (70461168)
南畝 晋平 兵庫医療大学, 薬学部, 講師 (40467527)
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| Project Period (FY) |
2011-04-28 – 2014-03-31
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| Keywords | 喫煙 / 血管障害 / ニコチン依存度 / トロンボスポンジン / 血管内皮機能 |
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| Research Abstract |
喫煙は、血管障害をはじめ、さまざまな病態の発症、増悪に関与する。我々は、ニコチンからコチニンへの代謝に関与するCYP2A6の遺伝子多型やα4ニコチン型アセチルコリン受容体多型がニコチン依存度に関連することを見出した。しかしながら、こうした遺伝子多型に基づくニコチン依存度と血管障害度の関連性は明らかではなく、検討を行った。また、同程度のニコチン依存度であっても血管障害度には個人差があるが、その原因は明らかでない。血管内皮NO産生能にThrombospondin-1(TSP1)が関与しており、TSP1血中濃度の喫煙による血管障害度への関与の検討を目的に、研究を開始した。禁煙を目的に禁煙外来を受診した連続61例を対象に検討を行った。年齢55±12歳、一酸化炭素濃度22±11 ppm、ニコチン依存度テスト8±1点、血管内皮依存性血管拡張反応（FMD）4.3±2.0%、であり、重回帰分析の結果、ニコチン依存度テストがFMDにて評価した血管障害度と有意な関連性を認めた（標準化係数ベータ0.262、有意確率0.043）。61例のうちCYP2A6遺伝子多型解析を終了した29例にてCYP2A6と血管障害度につきロジスティック解析を行ったが、現時点ではCYP2A6と血管障害度の間には有意な関連性を認めなかった（オッズ比0.174、オッズ比95%信頼区間;下限0.009、上限3.384、有意確率0.248）。CYP2A6と禁煙治療開始後5ヶ月における血管障害改善度についてもロジスティック解析検討を行ったが、現時点では有意な関連性を認めなかった（オッズ比0.208、オッズ比95%信頼区間;下限0.020、上限2.177、有意確率0.190）。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
我々は、ニコチンからコチニンへの代謝に関与するCYP2A6の遺伝子多型やα4ニコチン型アセチルコリン受容体多型がニコチン依存度に関連することを見出したが、こうした遺伝子多型に基づくニコチン依存度と血管障害度の関連性は明らかではなく、検討を行った。連続61例において、既往歴、現在の服薬状況、年齢、性別、喫煙歴の聴取、身長、体重の測定、呼気中一酸化炭素濃度測定、禁断症状調査（ミネソタ式ニコチン禁断症状調査票、喫煙の影響に関する質問票、喫煙衝動に関する調査票）、ニコチン依存度テスト、ファガストロームテストを施行した。また、連続61例において、高解像度超音波装置を用い、駆血による血流増加刺激前の上腕動脈の血管径と血流の測定と収縮期血圧より高い圧で一定時間駆血したのちに開放し血流増加に伴い拡張した上腕動脈血管径の計測から血管径の変化率を算出し、血管内皮依存性血管拡張反応評価を行った。また、ニトログリセリンによる血流増加刺激前の上腕動脈の血管径と血流の測定とニトログリセリン投与を行うことで生じた血流増加に伴い拡張した上腕動脈血管径の計測から血管径の変化率を算出し、血管内皮非依存性血管拡張反応評価を行った。上記の血管内皮依存性血管拡張反応評価と血管内皮非依存性血管拡張反応評価による血管機能評価は、禁煙治療開始前と禁煙治療開始後5ヶ月後、禁煙治療開始後1年後、にも行った。61例中38例において禁煙治療開始後5ヶ月後の血管機能評価を施行した。禁煙治療開始後1年後の血管機能評価は、現在順次施行中である。primer extension法、PCR-RFLP法、direct sequence法によるCYP2A6遺伝子多型解析は、61例中29例において解析を終了した。
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| Strategy for Future Research Activity |
61例中38例において、禁煙治療開始前と禁煙治療開始後5ヶ月後の血管内皮依存性血管拡張反応評価と血管内皮非依存性血管拡張反応評価による血管機能評価を終了した。今後、残る23例において、禁煙治療開始後5ヶ月後における血管機能評価を施行していく。61例において、禁煙治療開始後1年後の血管機能評価を現在施行中である。今後ひきつづき、1年後の血管機能評価を施行していく。primer extension法、PCR-RFLP法、direct sequence法によるCYP2A6遺伝子多型解析は、61例中29例において実施し解析を終了した。その29例においてCYP2A6遺伝子多型と血管障害度につきロジスティック解析を行ったが、現時点ではCYP2A6と血管障害度の間には有意な関連性を認めなかった。今後残る32例において、CYP2A6遺伝子多型解析を施行していく。また、α4ニコチン型アセチルコリン受容体遺伝子多型がニコチン依存度に関連することを見出しており、今後α4ニコチン型アセチルコリン受容体遺伝子多型についても遺伝子多型解析をすすめ、喫煙による血管障害度との関連性についても検討をすすめる。また、ニコチン依存度や喫煙量と喫煙による血管障害度は必ずしも相関しておらず、同程度の喫煙本数であっても血管障害が生じる程度に個人差が認められる。このような個人差が生じる機序に血管内皮細胞膜のCD36及びCD47との結合により一酸化窒素 (NO) の産生やNO下流のシグナル伝達を抑制、調節を行うthrombospondin-1(TSP1)遺伝子多型が関与する可能性があり、今後、TSP1血中濃度測定、TSP1遺伝子多型解析をひきつづき実施していく。現時点で61例であるが、ひきつづき禁煙治療を行う患者様方にご協力をいただき、検討への登録を継続して行っている。今後もひきつづき登録例数を増加させていただく。
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| Expenditure Plans for the Next FY Research Funding |
今後も継続して血管内皮依存性血管拡張反応評価と血管内皮非依存性血管拡張反応評価による血管機能評価を施行していくため、これらの血管機能評価に必要な物品、薬品の購入を継続して行う予定である。また、血管機能評価結果を記録するための媒体として、外付けハードディスク、USB、DVD-R,CD-Rの購入に使用する。禁煙治療前後で、患者様方から禁断症状調査（禁断症状調査票、喫煙の影響に関する質問票、喫煙衝動に関する調査票）、ニコチン依存度テスト、ファガストロームテストをおこなっており、これらの質問、アンケートを行うためのプリント資材、プリント印刷費として、今後も継続し使用する。primer extension法、PCR-RFLP法、direct sequence法による遺伝子多型解析を今後もひきつづき施行する予定であり、それらに必要な核酸抽出キット、多型判定キットの購入に使用する。また、TSP1血中濃度測定をはじめとする各種生理活性物質測定のためのELISAキット、抗体、試薬、薬品類を継続して購入する。また、共同研究者との遺伝子多型解析、各種生理活性物質測定における解析スケジュールの打ち合わせ、解析精度管理に関する打ち合わせ、サンプル管理に関する打ち合わせ、今後の方針の確認のための打ち合わせが必要であり、その打ち合わせ費用として使用する。血管内皮依存性血管拡張反応評価、血管内皮非依存性血管拡張反応評価、遺伝子多型解析、各種生理活性物質測定はいずれも登録数増をはかる途上であり、また解析、結果集積も途上であるが、症例数の一定の集積と解析結果集計ができたところで、中間解析として成果をまとめ、発表を行う。そのために必要な旅費に使用する。また、成果がまとまり、投稿が可能になった場合には、投稿に必要な文献、資材の購入費用、翻訳費、掲載費に使用する。
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