成人Ｔ細胞白血病幹細胞の遺伝子治療

2012 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 23591398
• Research Institution: Kagoshima University
• Principal Investigator: 鈴木 紳介 鹿児島大学, 医歯(薬)学総合研究科, 助教 (20437974)
• Keywords: 成人T細胞白血病 / 癌特異的増殖型アデノウイ ルス / 白血病幹細胞

Research Abstract

癌特異的増殖型アデノウイルス（conditionally replicating adenovirus:CRA）による成人T細胞白血病(adult T-cell leukemia:ATL)治療の基礎的確立を目的とする。 H23年度は、ヒトT細胞白血病ウイルスI型（HTLV-1）感染T細胞株を用いて、サービビンプロモーター依存性CRA（Surv.CRA）の殺細胞効果を明らかにし、成果を第73回日本血液学会総会で口演報告した。当該年度は更に、ATL幹細胞を特異的に攻撃しうる新たなCRA作成を進めた。慢性持続感染が原因となる悪性腫瘍では、ウィルスを標的とした治療法の開発が有効である。近年すべてのHTLV-1感染細胞で、組み込まれているプロウィルスの3’側long terminal repeat（LTR）は保存されており、マイナス鎖にコードされているHTLV-1 bZIP factor（HBZ）遺伝子が転写されていることが判明した（Satou Y et al, PLos Pathogens 2011）。HBZを標的にした治療は、従来の化学療法にはなかった発想である。腫瘍幹細胞を標的にするためには、急性型・リンパ腫型などの高悪性度ATLのみならず、くすぶり型・慢性型などの低悪性度ATLからHBZ遺伝子の転写がおこっている必要がある。我々は、1例のくすぶり型ATL患者で、HBZ遺伝子の mRNA 発現量を 無症候性キャリアーと比較した。発現量の比率は、 無症候性キャリアー：くすぶり型ATL＝1:13であった。3'LTRに存在する300塩基対のHBZプロモーター領域を人工合成遺伝子作成し、プラスミドベクターにクローニングした。アミノ酸変異を入れた変異体プロモーターも作成し、陰性コントロールとする。幹細胞を標的にしたHBZプロモーター依存性CRA（HBZ.CRA）の開発をすすめる。

Current Status of Research Progress

3: Progress in research has been slightly delayed.

Reason

サービビンプロモーター依存性CRA (Surv.CRA)を使用した細胞株での解析では、実験仮説に比較的沿った結果が得られている。患者検体の収集がやや滞っており、患者検体を使用した解析が遅れている。今後は、ATL患者検体を同意書に基づいて収集し、非増殖型アデノウイルスベクターの至適導入・発現条 件を明らかにするとともに、Surv.CRAだけでなく新たに作成するHBZプロモーター依存性CRA (HBZ.CRA) を用いて殺細胞効果を明らかにする。

Strategy for Future Research Activity

鹿児島大学大学院医歯学総合研究科先進治療科学専攻 運動機能修復学講座遺伝子治療・再生医学分野の小戝健一郎教授にHBZプロモーター依存性CRA (HBZ.CRA) の作成を依頼する。また私たちの教室では、高度免疫不全マウス(NOD/Scid/Jak3欠損マウス:NOJマウス)に患者由来ATL細胞を移植することで、マウス体内でヒトのATLの 構築が可能であることを確認している。ATL移植NOJマウスを用いてCRAの抗腫瘍効果を検討する。

Expenditure Plans for the Next FY Research Funding

1) real time PCR試薬　350千円, 細胞培養試薬　175千円, 遺伝子発現効率検査用試薬　150千円, アデノウイルス受容体発現検査用試薬　75千円, 殺細胞効果検出用試薬　50千円, アポト－シス検出用試薬　200千円
2) 人工合成遺伝子作成　244千円, 変異導入遺伝子作成　200千円
3) 旅費（国内旅費）第75回血液学会総会　札幌　100千円, 旅費（外国旅費）第55回アメリカ血液学会　ニューオリンズ　　250千円, 旅費（外国旅費）第49回アメリカ臨床腫瘍学会　シカゴ　250千円
4) その他　論文校正　100千円