2012 Fiscal Year Research-status Report
急性前骨髄性白血病キメラ遺伝子ＢＣＯＲ－ＲＡＲＡによる白血病発症機序の解明
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23591410
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| Research Institution | Fujita Health University |
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Principal Investigator |
山本 幸也 藤田保健衛生大学, 医学部, 講師 (90410703)
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| Keywords | 急性前骨髄球性白血病 / 急性骨髄球性白血病 / 転写因子 |
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| Research Abstract |
１、BCOR-RARA発現発現白血病細胞株の樹立：E2Fプロモーターを持つレンチウィルスベクターに組み換えて293T細胞での発現をウェスタンブロット法で確認した。293T細胞でレンチウィルスを産生させて白血病細胞株U937, 32D細胞に感染させた。puromicinで選択後、BCOR-RARAの発現をウェスタンブロット法で検討した。
２，急性骨髄性白血病患者サンプルを用いてBCOR、BCORL1、PCGF1遺伝子異常の有無をサンガー法、high resokution melting法を用いて解析した。
３，FIP1L1-RARAの機能解析：DNA結合解析、転写活性解析を行った。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
4: Progress in research has been delayed.
Reason
BCOR-RARA発現発現白血病細胞株の樹立では細胞株内での発現が低いため、あるいは他の可能性で十分な蛋白の発現が検出されなかった。原因について検討の必要がある。
BCOR、BCORL1、PCGF1遺伝子異常解析では遺伝子の短いPCGF1についてはサンガー法で解析をしたが異常は認められなかった。BCOR、BCORL1は遺伝子が多いため次世代シークエンサーを用いた解析を考えていたが高額になるため断念した。
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| Strategy for Future Research Activity |
１，ウィルスベクターを用いたBCOR-RARA発現システムの確立する。
２，急性骨髄性白血病患者サンプルを用いたBCOR、BCORL1遺伝子異常と臨床データとの相関
３，FIP1L1-RARAの機能解析
以上のテーマを引き続き推進する。
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| Expenditure Plans for the Next FY Research Funding |
１，各種ウィルスベクター、システムを比較検討して効率のよいものを選択する。その後、細胞株、マウスコロニーアッセイ、マウス個体内での造血系に与える影響を検討する。
２，high resokution melting法が遺伝子異常スクリーニングに使用可能であるかを検討するためABI 7900HTリアルタイムPCR機を用いて検討する。不可の場合、サンガー法を行う。
３，FIP1L1-RARAの細胞内局在、self-association責任部位の決定を行う。
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