2013 Fiscal Year Research-status Report
β３インテグリン機能発現におけるＩＬＫの役割解明と関連分子の探索・同定
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23591430
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| Research Institution | National Cardiovascular Center Research Institute |
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Principal Investigator |
本田 繁則 独立行政法人国立循環器病研究センター, 研究所, 室長 (00303959)
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| Keywords | β3インテグリン |
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| Research Abstract |
β3インテグリン（αIIbβ3とαVβ3）は血小板、血管構成細胞、腫瘍細胞などに発現しており、血栓症や血管病の発症・進展および腫瘍の浸潤・転移において重要な役割を担っている。しかし、その機能発現と制御機構の全容は明らかではない。私達は発現クローニングの手法を用いてintegrin-linked kinase (ILK)をαIIbβ3の活性化に関わる分子の1つとして同定した。本研究では、ILKのインテグリン機能発現に関わるメカニズムを明らかにするとともに、ILKが関連する細胞内シグナル分子および新たなβ3インテグリン機能発現因子の探索・同定を目指している。
今回はインテグリン活性化に必須のタリンとILK-PINCH-parvin (IPP) 複合体の相互作用についてαIIbβ3を発現するCHO細胞を用いて検討を行なった。αIIbβ3はCHO細胞上では非活性の状態を示す。この細胞にタリンのヘッドドメイン（THD）を過剰発現するとαIIbβ3の活性化を誘導できる。この条件でIPPを過剰発現させたところTHD単独よりさらに強い活性化を誘導した。一方、THD非存在下ではIPPを過剰発現しても活性化を誘導しなかった。また、IPP複合体とインテグリン活性化の関連について、PINCH結合障害あるいはparvin結合障害のあるミュータントILKを作製し発現実験を行った。非活性化型αIIbα6Bβ3を発現するILK欠損ミュータント細胞を用いて検討した。野生型ILKおよびミュータントILKを発現させたところ、野生型ILKは活性化を誘導したが何れのミュータントILKも活性化を誘導しなかった。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
ミュータントなどのcDNAの作製と機能解析は順調に進めることができた。一部の抗体で入手が困難なものがあった。現在までの成績をまとめ論文として発表した。
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| Strategy for Future Research Activity |
ILK-PINCH-parvin複合体のインテグリン機能発現メカニズムについてさらに解析を進める。引き続いて発現クローニングなどの手法を用いて新たなインテグリン機能発現因子の同定を目的とした探索実験を実施する。
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| Expenditure Plans for the Next FY Research Funding |
使用を予定していた抗体や試薬類を安価で購入することができた。消耗品を節約して使用した。
抗体、遺伝子導入試薬、遺伝子ノックダウン試薬、遺伝子ノックアウト用キット、細胞培養関連試薬と器具などの購入、学会参加や論文投稿に関連した費用などの使用を計画している。
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[Journal Article] Agonist stimulation, talin-1, and kindlin-3 are crucial for αIIbβ3 activation in a human megakaryoblastic cell line, CMK2013
Author(s)
Nakazawa T, Tadokoro S, Kamae T, Kiyomizu K, Kashiwagi H, Honda S, Kanakura Y, Tomiyama Y
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Journal Title
Exp Hematol
Volume: 41
Pages: 79-90
DOI
Peer Reviewed
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