2011 Fiscal Year Research-status Report
miRNAによる関節リウマチ滑膜細胞リプログラミングの誘導
Project/Area Number |
23591440
|
Research Institution | Nagasaki University |
Principal Investigator |
山崎 聡士 長崎大学, 医歯(薬)学総合研究科, 助教 (30367388)
|
Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
川上 純 長崎大学, 医歯(薬)学総合研究科, 教授 (90325639)
|
Project Period (FY) |
2011-04-28 – 2014-03-31
|
Keywords | 関節リウマチ / miRNA / 受容体 / 分化誘導 / 翻訳制御 / locked nucleic acid / サイトカイン / mRNA崩壊 |
Research Abstract |
関節リウマチの線維芽細胞様滑膜細胞 (Fibroblast-like Synovial cell: FLS) を用いた下記の一連の研究成果が得られた。1:TGFβ誘導性miRNAの標的mRNAの同定に関して、(1)TGFβ誘導性miRNAの予想標的mRNAの配列情報からの予測、(2)TGFβ刺激をしたFLSのRNAサンプルを用いたDNA arrayによるmRNAの網羅的解析により、TGFβあるいはTGFβ誘導性miRNAで制御される標的mRNAの候補選択を完了した。複数の標的mRNAが選択された。2:「TGFβの効果」と「TGFβ誘導性miRNAの効果」の確認と比較に関して、TGFβ刺激の有効性確認の為のリン酸化Smadのウェスタンブロット、miRNA導入効率の確認の為のin situ hybridizationを確立した。TGF刺激と4種類のmiRNAの導入による蛋白発現比較研究により、共通に制御される候補分子の一つとして、ある膜型受容体が選択された。これは、関節リウマチとの関連が期待させるサイトカインの受容体である。しかし、この受容体は1で選択された標的mRNAではなく、mRNA崩壊ではなく、翻訳制御を受けている分子であると想像された。3:LNA miRNA阻害核酸を用いることで阻害されるTGFβ効果の確認に関して、アンチセンスlocked nucleic acid (LNA) が標的とハイブリダイズする事をノーザンブロットにて確認した。今後、Exiqon社 miRCURY LNA™ microRNA Inhibitorsを導入したFLSをTGFβで刺激し、標的とするTGF表現系を阻害するかを検証する。
|
Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
達成できている点として以下の3点が挙げられる。1:TGFβ誘導性miRNAの標的mRNAの同定候補を決定する事ができた。2:候補分子のFLSにおける発現を確認できた。3:アンチセンスLNAデザインの完了。予定より遅れている点として、アンチセンスLNAのFLSへの効果の評価が平成23年度中には完了しなかった。最も重要な標的分子の同定ができた点は予定より早いが、アンチセンスLNAのFLSへの導入とその効果(TGFβ誘導性miRNA効果の減弱)の確認を急ぐ必要がある。
|
Strategy for Future Research Activity |
TGFβ誘導性miRNAの配列依存性の影響を直接的に証明する目的で、アンチセンスLNAのFLSへの導入とその効果発揮の確認を優先事項と考える。平行して、有力候補分子のFLSにおける意義の探索を行ない、TGFβ → miRNA → FLS機能 の軸を証明していく。
|
Expenditure Plans for the Next FY Research Funding |
研究計画に沿って、次年度の研究費を使用していく。おもに、培養FLSに対してアンチセンスLNAを導入する実験、標的分子のmRNAと蛋白発現の確認実験、FLSの機能解析に関するアッセイに対して研究費を使用する。
|
Research Products
(3 results)
-
-
[Journal Article] Post-transcriptional regulation of IL-6 production by Zc3h12a in fibroblast-like synovial cells.2011
Author(s)
Koga T, Yamasaki S, Migita K, Kita J, Okada A, Kawashiri S, Iwamoto N, Tamai M, Arima K, Origuchi T, Nakamura H, Osaki M, Tsurumoto T, Shindo H, Eguchi K, Kawakami A.
-
Journal Title
Clin Exp Rheumatol.
Volume: 29
Pages: 906-912
Peer Reviewed
-