2011 Fiscal Year Research-status Report
成熟Ｔ細胞リンパ腫でのｃ－ＭｙｂとＡＢＣＧ２／ＢＣＲＰによる抗癌剤耐性機序の解明
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23591633
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| Research Institution | Kinki University |
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Principal Investigator |
中山 隆志 近畿大学, 医学部, 講師 (60319663)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
義江 修 近畿大学, 医学部, 教授 (10166910)
樋口 智紀 近畿大学, 医学部, 助教 (00448771)
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| Project Period (FY) |
2011-04-28 – 2014-03-31
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| Keywords | ABCG2/BCRP / c-Myb / Fra-2 / ATLL |
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| Research Abstract |
研究代表者はこれまでに、AP1ファミリーのFra-2が成人T細胞白血病/リンパ腫（ATLL）や皮膚T細胞リンパ腫（CTCL）に構成的に発現し、ケモカイン受容体CCR4発現を誘導することを明らかにした。さらに、Fra-2は原癌遺伝子であるc-Myb、MDM2とBcl-6の発現誘導を介してATLLやCTCLの細胞増殖にも関与することを報告した（Oncogene 2008, Anticancer Res. 2012）。ATLLやCTCLでは、c-Mybの主要な標的遺伝子であるc-MycとBcl-2の恒常的な発現は認められなかったため、固形癌とは異なるc-Myb標的遺伝子を持つことが示唆された。そこで研究代表者は、マイクロアレイ解析を用いたc-Myb標的遺伝子の探索を行い、成熟T細胞リンパ腫でのc-Mybの下流標的遺伝子の候補として薬物トランスポーターABCG2/BCRPを同定した。様々なATLLとCTCL細胞株を用いてc-Myb siRNAのABCG2/BCRP発現への影響を検討した結果、全ての細胞株においてc-Mybの発現抑制によりABCG2/BCRPの発現も抑制されることが確認された。また、c-Mybの発現抑制によってATLLとCTCLの細胞増殖は抑制されたが、その効果は非常に小さいものであった。c-MybとABCG2/BCRP mRNAのATLL臨床検体を用いた発現解析では、ともに正常CD4陽性細胞では発現せず、ATLLにおいて高頻度に発現し、有意な発現相関を示した。c-MybとABCG2/BCRPのタンパクレベルでの発現についても臨床検体を用いた免疫組織染色による解析を進めており、現在、それぞれの抗体の染色条件を検討している。これらの結果から、c-Mybは成熟T細胞リンパ腫の細胞増殖というよりはむしろ薬剤耐性において重要な役割を果たしている可能性が示唆された。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
本年度我々は、１）ATLLとCTCL臨床検体を用いたc-MybとABCG2/BCRPの発現と相関の解析、２）ATLLおよびCTCL細胞株を用いたABCG2/BCRPのプロモーター解析、３）ABCG2/BCRPプロモーターの転写因子の結合解析、４）ABCG2/BCRPプロモーター活性化におけるc-Mybコファクターの与える影響の検討、５）抗癌剤のABCG2/BCRP発現に与える影響の検討を計画し、実行した。その結果、我々はc-MybとABCG2/BCRP mRNAのATLL臨床検体を用いた発現解析では、ともに正常CD4陽性細胞では発現せず、ATLLにおいて高頻度に発現し、有意な発現相関を示すことを明らかにした。ABCG2/BCRPの発現制御解析については準備段階である。本年度半ばに研究代表者の学内異動が決まり、その際に生じた事務手続きや業務の引き継ぎ等で多くの時間を費やさざるを得ず、ABCG2/BCRPの発現制御解析については本年度内での達成は叶わなかった。したがって、次年度は本年度において十分に実行できなかった研究計画も含めて遂行する必要がある。
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| Strategy for Future Research Activity |
本年度は学内異動のため、十分に研究計画を進めることができなかった。この異動に伴う本研究課題の実行への影響は、大学内部での異動であることから、研究機器設備の使用、試料の取り扱い、共同研究者との連絡等、これまで通りであるため、ほぼないといえる。次年度は、本年度未実行の計画を組み込む必要があるため、少し計画を変更する必要があるが、ATLLにおけるABCG2の高発現とそれに伴う抗癌剤耐性の増強について相関を示唆する基礎データをすでに得られていることから、本研究計画全体の大幅な変更は生じない。次年度は、本年度達成できなかったABCG2/BCRPの発現制御解析およびABCG2/BCRPの抗癌剤耐性における役割について検討を行う。大きな計画の変更はない。
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| Expenditure Plans for the Next FY Research Funding |
本研究計画の実行において、主に必要となる研究経費は細胞培養や解析に使用する試薬、キットなどの消耗品費にある。本年度同様、次年度もこれら消耗品費に研究費を使用する。また、次年度に必要となる機器は当該研究施設にて整備されているため、新たに購入する必要はない。しかしながら、本研究目的を達成するためにABCG2/BCRPの蛍光標識された基質、real-time PCR解析に必要なTaqMan probe、免疫組織染色に用いる抗体、本研究に関連する遺伝子の発現を抑制するためのsiRNAなど一般試薬類と比較して単価がやや高価なものが必要となる。さらに、次年度以降にATLLモデルマウス作製も計画しているため、次年度の研究費だけでは十分でない可能性がある。したがって、本年度未使用の助成金はこれらの研究経費への補填とする予定である。
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