消化器癌の血清ＤＮＡ断片を標的とした悪性度に関する遺伝子診断法の基礎的臨床的検討

2012 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 23591907
• Research Institution: Tokai University
• Principal Investigator: 小澤 壮治 東海大学, 医学部, 教授 (10169287)
• Keywords: 核酸

Research Abstract

基礎研究として、ヒト消化器癌細胞株移植ヌードマウスモデルを用いた動物実験を計画していた。東海大学動物実験委員会での審査を受け、動物実験実施の承認を得た。
そこで、ヒト食道癌細胞株(TE1, TE4, TE6, TE8, TE10, TE11, TE14)を入手し、それぞれの細胞増殖能を測定した。その後、ヒト食道癌細胞株(TE1, TE4, TE6, TE10, TE11)をBALAB/cA-nu/nuヌードマウス背側皮下に移植した。自然経過群として、癌細胞移植時から腫瘍形成、腫瘍増大、死亡にいたるまでの4時点での観察を継続中である。
臨床研究として、消化器癌患者から採取した血液を用いた研究を計画していた。東海大学医学部臨床研究審査委員会での審査を受け、当該臨床研究の実施の承認を得た。適切な臨床例からの血液採取と、血液保存のシステムを確立した。

Current Status of Research Progress

3: Progress in research has been slightly delayed.

Reason

平成23年3月11日に生じた東日本大震災の影響を受けて、全体活動の予定が当初の予定より遅れてはいるが、基礎研究および臨床研究の両者とも学内各種審査委員会の審査を経て、具体的に進行中である。

Strategy for Future Research Activity

【基礎研究】
１．ヌードマウスモデルにおける検討群の設定：腫瘍切除群：換算腫瘍重量(RW)100mgまで腫瘍形成後に、腫瘍を50%切除または100%切除する。切除前、切除1日後から15日後まで2日毎に採血の後に犠死させる。化学療法群：換算腫瘍重量(RW)100mgまで腫瘍形成後に、5-FUまたはCDDPを腹腔内投与する。薬剤投与前、投与1日後から15日後まで2日毎に採血の後に犠死させる。２．ヌードマウスの観察：ヌードマウスの生死、体重、換算腫瘍重量(RW)を経時的に観察する。３．血清中遊離DNA断片の測定：ヌードマウスから採血し、犠死させた後、換算腫瘍重量(RW)と実測腫瘍重量を測定する。採取した血液は、3,000rpm, 30分で遠心分離をした後、血清を分注し-80℃で冷凍保存する。血清中から抽出したDNAとSYBR® Premix Ex Taq™試薬とAlu115またはAlu247のprimerを用いてReal Time PCRを行う。標準資料を用いた検量線を用意し、Ct値から、Alu115とAlu247のDNA量を定量し、Alu247DNA / Alu115 DNA比を算出し、「長鎖/短鎖 DNA割合」とする。４．結果の検討：各群と「長鎖/短鎖 DNA割合」の変化を検討する。
【臨床研究】
１．消化器癌患者からの血液採取：食道癌・胃癌患者の治療前と手術後、また化学療法後経時的に末梢血液を採取する。血液は遠心分離をした後、血清を分注し冷凍保存する。２．血清中遊離DNA断片の測定：上記基礎研究と同様に行う。

Expenditure Plans for the Next FY Research Funding

該当なし