消化器癌幹細胞と微小環境との相互作用に関与する治療標的マイクロリボ核酸の探索

2012 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 23591920
• Research Institution: University of Toyama
• Principal Investigator: 奥村 知之 富山大学, 大学院医学薬学研究部, 助教 (10533523)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 塚田 一博 富山大学, 大学院医学薬学研究部, 教授 (90171967) ; 嶋田 裕 富山大学, 大学院医学薬学研究部, 准教授 (30216072)
• Keywords: 食道癌

Research Abstract

【背景】我々は食道扁平上皮癌において低親和性神経成長因子受容体（p75NTR）が幹細胞様形質をもつ細胞で発現していることを報告してきた。さらにマイクロアレイを用いた網羅的解析により食道癌幹細胞の分化に関わる可能性のあるmicroRNAとしてmiR-203を同定した。【目的】miR-203を標的とした食道扁平上皮癌分化誘導療法の可能性を検討する。【方法】食道癌細胞株（KYSE）にmiR-203強制発現ベクターを導入し安定発現株を作成し分子生物学的機能解析を行った。【結果】mir203安定発現株において多くの細胞が膨化し増殖が抑制された。RT-PCRの結果、角化マーカーであるインボルクリンの発現が著明に亢進していた。FACSおよびRT-PCRの結果、p75NTR、p63およびBmi1の発現に変化を認めなかった。ヌードマウス皮下への移植によってmir203発現株においてMock株と比べて形成された腫瘍径が有意に小さく、組織学的に極性を示しつつ遠心性に分化する傾向を示した。免疫染色にてKi67陽性細胞およびp63発現細胞が少数、腫瘍中心部に位置し、その外側に位置する細胞ででインボルクリンの発現を認めた。【結語】食道扁平上皮癌においてmiR-203が幹細胞から角化細胞への分化と極性の回復を促進しているものと考えられ、分化誘導療法の標的となる可能性が示唆された。

Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

食道癌細胞株を用いてのALDEFLUORによるALDH-1/p75NTR陽性細胞の分離に技術的な困難を生じたため、FFPEブロックからのRNA抽出を行い、幹細胞特異的microRNA候補を探索した。その後セルソーターを用いてp75NTR陽性細胞の分離に進んだが一時的に技術的な困難を生じた。

Strategy for Future Research Activity

miRNAの標的分子を同定し機能解析を行う。
既に解析を進めているmiR-203についてその標的分子をTarget Predictionにて検索しＲＴ－ＰＣＲ，免疫染色、レポーターアッセイなどを用いて検討する。
新規miRNAについて機能解析を進める。

Expenditure Plans for the Next FY Research Funding

該当なし

Research Products

• [Journal Article] Establishment and characterization of a novel xenograft model of human gastrointestinal stromal tumor in mice. (2013)
  • Author(s): Shimada Y, Okumura T, Sekine S, Moriyama M, Sawada S, Matsui K, Yoshioka I, Hojo S, Yoshida T, Nagata T, Fukuoka J, Tsukada K.
  • Journal Title: Anticancer Res Volume: 33 Pages: 175-181
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Expression analysis of iPS cell - inductive genes in esophageal squamous cell carcinoma by tissue microarray. (2012)
  • Author(s): Shimada Y, Okumura T, Sekine S, Moriyama M, Sawada S, Matsui K, Yoshioka I, Hojo S, Yoshida T, Nagata T, Fukuoka J, Tsukada K.
  • Journal Title: Anticancer Res Volume: 32 Pages: 5507-5514
  • Peer Reviewed
• [Presentation] microRNAを用いた食道扁平上皮癌分化誘導療法の可能性 (2013)
  • Author(s): 奥村知之、嶋田 裕、森山 亮仁、大村 哲也、関根 慎一、橋本 伊佐也、渋谷 和人、北條 荘三、松井 恒志、吉岡 伊作、澤田 成朗、吉田 徹、長田 拓哉、塚田 一博
  • Organizer: 第1５回 外科分子細胞治療研究会
  • Place of Presentation: 福岡
  • Year and Date: 20130411-20130411
  • Invited
• [Presentation] 食道扁平上皮癌における幹細胞制御microRNAの探索とその臨床的意義 (2013)
  • Author(s): 奥村知之、嶋田裕、森山亮仁、大村哲也、関根慎一、渡邊智子、北條荘三、渋谷和人、松井恒志、吉岡伊作、澤田成朗、吉田徹、長田拓哉、塚田一博
  • Organizer: 第113回日本外科学会定期学術集会
  • Place of Presentation: 福岡
  • Year and Date: 2013-04-12
• [Presentation] Identification of micrornas whichregulate stem cell property in esophageal squamous cell carcinoma (2012)
  • Author(s): Okumura T、Shimada Y, Sekine S, Moriyama M, Omura T, Kamiyama K, Hori R, Watanabe T, Hojo S, Matsui K, Yoshioka I, Sawada S, Yoshida T, Nagata T, Tsukada K
  • Organizer: 13rd World Congress of the international society for diseases of the esophagus
  • Place of Presentation: ベニス、イタリア
  • Year and Date: 20121015-20121017
• [Presentation] Identification of microRNAs which regulate stem cell property in esophageal squamous cell carcinoma (2012)
  • Author(s): T. Okumura, Y. Shimada, T. Moriyama. S. Sekine, M. Omura, K. Kamiyama, R. Hori, T. Watanabe, S. Hojo, K. Matsui, I. Yoshioka, S. Sawada, T. Yoshida, T. Nagata, K. Tsukada
  • Organizer: 第67回日本消化器外科学会総会
  • Place of Presentation: 富山
  • Year and Date: 20120718-20120720
• [Presentation] 食道扁平上皮癌における腫瘍幹細胞の同定とその制御分子の探索 (2012)
  • Author(s): 奥村知之、嶋田 裕，関根慎一，森山亮仁，大村哲也，神山公希，北條荘三，堀 亮太，長田拓哉，塚田一博
  • Organizer: 第６６回日本食道学会学術集会
  • Place of Presentation: 軽井沢
  • Year and Date: 20120621-20120622