2012 Fiscal Year Research-status Report
臨床応用を目的とした膵癌におけるＬｉｐｏｃａｌｉｎ－２の分子生物学的役割の検討
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23592019
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| Research Institution | Nagoya City University |
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Principal Investigator |
竹山 廣光 名古屋市立大学, 医学(系)研究科(研究院), 教授 (00216946)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
松尾 洋一 名古屋市立大学, 医学(系)研究科(研究院), 講師 (40381800)
越智 靖夫 名古屋市立大学, 医学(系)研究科(研究院), 助教 (80453067)
高橋 広城 名古屋市立大学, 医学(系)研究科(研究院), 講師 (30381792)
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| Keywords | 膵癌 / Lipocaline-2 / 血管新生 / 浸潤 |
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| Research Abstract |
1.臨床検体を用いたLipocaline-2(Lcn2)発現の検討．当科での手術症例の臨床検体を用いてLcn2の免疫染色を行った．予備実験では，膵癌患者と非膵癌患者との間で有意差をもってLcn2発現が膵癌患者に多い傾向であることを確認している．
2.Lcn2の分子生物学的役割の検討．膵癌細胞株をLcn2強発現株(BxPC-3およびAsPC-1: well to moderate diff.)およびLcn2弱発現株(Panc-1およびMIA PaCa-2: poorly diff.)に分類し，それぞれに対してLcn2抑制株，Lcn2強発現株を樹立した．興味深いことに，高分化で発現が強く，低分化で発現が減弱する傾向にあった．これにより，癌化初期にLcn2のタンパク発現が生じ，進行と同時に減弱することが示唆された．
3.Lcn2の導入または抑制によって，癌細胞が分泌するサイトカイン発現の差異をELISAで検討した．Lcn2の強発現によって，血管新生因子VEGF発現が増強することを認めている．
4.分子生物学的特長の比較検討．Lcn2の導入または抑制によって生じる細胞特徴の変化の特徴を，増殖実験（WST-1 assay），接着実験，浸潤実験，で評価検討した． Lcn2弱発現株はLcn2強発現株に比べて，増殖，接着，および浸潤能が亢進している傾向を認めた． Lcn2弱発現株はLcn2強発現株に比べてVEGF発現が少なく，in vitroの血管新生実験でもLcn2弱発現株は血管新生能が亢進していた．以上により，膵癌初期にLcn2の発現が多く，これが膵癌血管新生に抑制的に作用しているが，Lcn2の発現が減弱する進行癌では，血管新生が亢進し，さらに腫瘍増殖が付随して亢進することが示唆された．今後はin vivoでの実験を行い，Lcn2と膵癌血管新生の関連を検討していく予定である．
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
Lcn2の発現を膵癌細胞株および臨床検体で確認できており，その分子生物学的役割も解明しつつある．早期膵癌のマーカーとしてだけでなく，新規の抗血管新生薬としての働きも期待できる．
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| Strategy for Future Research Activity |
in vivo実験で，Lcn-2の発現により腫瘍が大きくなることを確認する予定である．また，これらの組織を用いて免疫染色を行い，Lcn-2の腫瘍増大効果のメカニズムを検討する予定である．
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| Expenditure Plans for the Next FY Research Funding |
①Lcn2の分子生物学的役割の検討(in vivo)(松尾洋一，竹山廣光) Male athymic NCr nude mice(N=5/group)を用いる.移植する膵癌細胞株はMIA PaCa-2 with/without Lcn2 (stably transduced with luciferase)を用い，移植法はBouvet M et alの報告に従って行う．移植後一週間毎に，IVIS200(Xenogen)を用いて腫瘍サイズの変化を測定する.この手技は確立している．予備実験では，Lcn2の抗腫瘍効果を認めている．
②Ki-67 analysis（松尾洋一，高橋広城） Formalin-fixed, paraffin-embedded (FFPE) sectionsを抗Ki-67抗体で免疫染色する．Ki-67陽性細胞を計測し(Ki-67 index)，両群の腫瘍増殖能を比較検討する．
③CD31染色（松尾洋一，高橋広城） 同様にFFPE切片を抗CD31抗体で免疫染色し，micro vessel densityを計測する．これにより両群間で血管新生能を比較検討する．
④Lcn2経口投与または腹腔内投与モデル（in vivo）（松尾洋一，竹山廣光) recombinant Lcn2を経口または腹腔内投与を作成する．これにより腫瘍抑制効果および抗血管新生効果の有無を検討する．
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Research Products
(13 results)
