2011 Fiscal Year Research-status Report
多中性骨肉腫樹立細胞株を用いた病態解明と転移抑制のための実験的研究
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23592201
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| Research Institution | Fujita Health University |
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Principal Investigator |
山田 治基 藤田保健衛生大学, 医学部, 教授 (40146626)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
山本 直樹 藤田保健衛生大学, 大学共同利用機関等の部局等, 講師 (00267957)
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| Project Period (FY) |
2011-04-28 – 2016-03-31
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| Keywords | 多中心性骨肉腫 / 細胞株 / 骨転移 / GFP遺伝子導入 / ケモカイン |
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| Research Abstract |
本年度（平成２３年度）における研究の達成目標として、樹立した多中心性細胞株を用いてin vivoにおける細胞株の移植の実験系を構築し、１）細胞動態の観察２）高い確率で骨転移を形成する細胞株（亜株）を新たに作成することである。1）については免疫不全マウスの皮下へ移植する実験において増殖、腫瘤を形成することが確認できている。現在は移植部位からの転移巣検索をより確実かつ容易にするために、腫瘍細胞内へ蛍光色素であるGFPの遺伝子導入を検討しており、一部の細胞ではその形態を維持しつつ増殖していることが確認できている。近日中に移植実験に再度トライする予定である。２）については現在移植細胞は肺転移および骨転移することが確認できてはいるが、特に骨転移巣における病変部を肉眼的に同定することは、蛍光色素なしには非常に困難であるため、安定したGFPの遺伝子導入を現在急務として行っているところである。また来年度（平成２４年度）の研究課題ではあるが、乳癌や前立腺癌など骨親和性の強い腫瘍細胞の骨転移に特異的に関与するとされる因子にケモカインの一つであるCXCR4とそのリガンドであるCXCL12 （CXCR4/CXCL12 axis）の報告があり、これらの腫瘍細胞における原発巣と骨転移巣の発現において、骨転移巣で有意にその発現が増強することが報告されている。今回我々は新たに原発巣と二次性病変のCXCR4/CXCL12axisの発現を、real-time PCR,免疫染色にて確認したところ、いずれの因子も二次性病変で増強していることを確認することができた。このデータは二次性病変がやはり骨転移巣であること、多中心性骨病変が骨転移によって成り立つものであることを示唆する所見であると考えられ、現在投稿に向けて準備中である。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
移植実験においては移植細胞のtumorigenesisおよび転移は確認できているため、おおむね順調に進んでいると考える。今後は転移巣をdetectするための方法としてのGFP導入を進めたいと考える。また現在、他症例由来の骨肉腫細胞においても細胞株樹立を検討しており、継代培養中である。中には肺転移を来たしているものもあり、転移巣由来の細胞株も現在樹立中である。
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| Strategy for Future Research Activity |
樹立細胞株におけるGFP導入はやや細胞毒性か強いためか、増殖が一定していない側面がある。今現在対応については検討中である。安定しなければやや精度は落ちるが、転移巣は骨形成性病変のため、レントゲンによる確認でも行うことは可能なため、それによる代替も考慮中である。骨特異的に転移を来たす細胞株を樹立したのち、現在継代中の肺転移巣由来細胞株との網羅的比較を、ＤＮＡマイクロアレイを用いて行う。さらに、本学総合医科学研究所・抗体プロジェクトが開発したヒト抗体型ファージライブラリーを用いて骨肉腫細胞特異抗体を単離し、次にこれらを用いて骨肉腫組織染色を行いその特異性を確認し、本抗体並びに本抗原が細胞株の増殖並びに転移において抑制的効果を発揮するかをin vitro, in vivoにて検証する。さらに、本細胞株はp53遺伝子の変異を認めており、p53遺伝子導入についても検討をおこなう。
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| Expenditure Plans for the Next FY Research Funding |
昨年度同様、主要な用途は消耗品である。本年度も外注検査としてDNAマイクロアレイを予定している。
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Research Products
(2 results)
