無血清、無フィーダーによる未分化培養ヒト角膜輪部上皮培養法の確立

2014 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 23592618
• Research Institution: The University of Tokyo
• Principal Investigator: 山上 聡 東京大学, 医学部附属病院, 准教授 (10220245)
• Project Period (FY): 2011-04-28 – 2015-03-31
• Keywords: 幹細胞疲弊症眼 / 無血清 / 無フィーダー

Outline of Annual Research Achievements

培養ヒト角膜上皮細胞シート移植は、治療が禁忌とされた幹細胞疲弊症眼に対する眼表面再建を可能とする再生医療であるが、細胞シートの作製に異種のフィーダー細胞としてマウス3T3線維芽細胞との共培養やウシ血清を用いることが必須であった。これに対し、我々は無血清、無フィーダーによる新しい培養法を考案し報告したが、細胞の未分化性維持という点では未だ不十分であった。そこでこの新しい培養法を細胞の未分化性維持の可能な培養法に改良し、従来の未知成分による感染リスクおよび施設間で同一の細胞シートの作製が困難という問題点を解決することを目的とした検討をおこなった。アメリカアイバンクから供給される研究用ヒト角膜から輪部組織を採取し、基礎培地にB-27添加剤を使用することを基本とし、さまざまな増殖因子を用いた培養を行った。検討した多くの増殖因子の中で十分な増殖能を示した増殖因子は、HGF (hepatocyte growth factor), EGF (epidermal growth factor), KGF (keratinocyte growth factor)であった。HGFは良好な増殖能を示したものの、細胞シートしての形態に問題があったため除外した。EGF, KGFに関しては未分化マーカーの発現検討を行い、結果としてKGFを使用することでフィーダー細胞を用いる培養法と同等の細胞シートを作製できるとの結論に至った。現在ヒト幹細胞取り扱い指針に則った臨床研究を実施し、経過観察中である。