2013 Fiscal Year Annual Research Report
新規創薬に向けた、ＣＣＮ２／３の協調作用による軟骨の発生・分化調節機構の解明
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23593014
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| Research Institution | Asahi University |
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Principal Investigator |
川木 晴美 朝日大学, 歯学部, 講師 (70513670)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
近藤 信夫 朝日大学, 歯学部, 教授 (40202072)
高山 英次 朝日大学, 歯学部, 准教授 (70533446)
神谷 真子 朝日大学, 歯学部, 助教 (80181907)
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| Keywords | 創薬 / 再生医療 / 軟骨 / CCNファミリー / MAPK / ERK / CCN2 / CCN3 |
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| Research Abstract |
最終年度は、軟骨の初期分化段階にあるE10.5マウス胎仔の肢芽のパラフィン包埋切片および肢芽より調整した細胞を用いた遺伝子発現解析およびmicro mass培養系を用いた解析から、CCN2およびCCN3の動態、機能について以下の結果を得た。
まずE10.5マウスの肢芽の切片を用いて、CCN2およびCCN3の免疫染色と軟骨基質を検出する染色を行った結果、この時期ではCCN2は検出されなかったがCCN3は肢芽全体に発現が見られ、アルシアンブルーおよびサフラニンOの染色性は微弱であった。
次いで、同時期から新生仔までの肢芽を破砕してRNAを調整し、リアルタイムPCR法にてCCNファミリーメンバーの発現解析を試みた結果、E10.5でCCN3の発現がみとめられたが、他のメンバーは検出限界以下であった。そしてCCN3の発現上昇に伴ってCCN2の発現がみられはじめた。以上から、軟骨基質の産生が乏しい、初期分化段階にある軟骨細胞でCCN3が他のメンバーに先駆けて発現し、続いてCCN2が発現することが示された。
そこで、この時期のCCN3の機能を解析するためにmicro mass細胞培養系にリコンビナントCCN3を添加する系、およびsiRNAにてCCN3をノックダウンする系にて比較検討したところCCN3の添加でアルシアンブルーの染色性が顕著に増加し、ノックダウンにより染色性が低下した。また、昨年度の解析でCCN3の添加によりERK1/2の活性化が上昇したことから、他のMAPKについても検討したところ、p38, JNKでは変化は見られず、CCN3はERK1/2の活性化に関与していることが明らかとなった。そこでERK1/2経路の肢芽細胞の増殖、分化への関与について検討するためMAPK阻害剤を用いて解析した結果、CCN3の肢芽細胞の増殖促進およびプロテオグリカン産生促進にはERK1/2経路が関与していることが明らかとなった。
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[Journal Article] Compressive Force-Produced CCN2 Induces Osteocyte Apoptosis Through ERK1/2 Pathway.2014
Author(s)
Hoshi K, Kawaki H, Takahashi I, Takeshita N, Seiryu M, Murshid SA, Masuda T, Anada T, Kato R, Kitaura H, Suzuki O, Takano-Yamamoto T.
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Journal Title
J Bone Miner Res.
Volume: in press
Pages: in press
DOI
Peer Reviewed
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[Journal Article] CCN2 as a novel molecule supporting energy metabolism of chondrocytes.2014
Author(s)
Maeda-Uematsu A, Kubota S, Kawaki H, Kawata K, Miyake Y, Hattori T, Nishida T, Moritani N, Lyons KM, Iida S, Takigawa M.
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Journal Title
J Cell Biochem.
Volume: 115
Pages: 854-865
DOI
Peer Reviewed
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[Presentation] 圧縮力負荷に伴い骨細胞より産生されたCCN2はERK1/2経路を介したアポトーシスを誘導する2014
Author(s)
星健治, 川木晴美, 髙橋一郎, 竹下信郎, 清流正弘, Sakhr A Murshid, 益田泰輔, 穴田貴久, 加藤龍史, 北浦英樹, 鈴木治, 山本照子
Organizer
第53回日本生体医工学会大会
Place of Presentation
仙台市
Year and Date
20140624-20140626
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