2012 Fiscal Year Annual Research Report
細胞周期特異的デグロンによる蛋白質発現制御と機能解析への応用
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23651046
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| Research Institution | Kyoto University |
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Principal Investigator |
高田 穣 京都大学, 放射線生物研究センター, 教授 (30281728)
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| Keywords | DNA修復 / DNA損傷チェックポイント / Treslin / Geminin / Cdt1 / 細胞周期特異的デグロン |
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| Research Abstract |
FUCCIの構造と、従来明らかにされたCdt1とGeminin分解の分子機構を参考に、ニワトリCdt1とGeminin配列からデグロン配列候補の同定を行い、ニワトリCdt1（アミノ酸配列1-499）、Cdt1 （150-499）、Geminin（1-110）をそれぞれクローニングし、 GFP融合型デグロン発現ベクターを作成した。作成したGFP融合型デグロン発現ベクターを野生型DT40にstableに導入し、発現細胞の単離を行ったが、発現量が少なく、残念ながら細胞周期を確実に同定するに至らなかった。
最近、チェックポイント因子であるTopBP1遺伝子の会合因子として同定されたTreslin/ticrr遺伝子は酵母の複製開始の必須因子で、CDKのリン酸化基質であるSld3ホモログとされる。このTreslin/ticrr遺伝子を、オーキシン誘導性デグロン（AID）の系を用いたコンディショナル細胞として作成した。オーキシン添加後わずか15分程度ののち、発現が完全に失われる細胞が作成できた。この細胞は予想どおりlethalであったが、様々な薬剤には特に感受性を示さなかった。今後、チェックポイントの欠損について解析を進める予定である。
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[Journal Article] Matched sibling donor stem cell transplantation for Fanconi anemia patients with T-cell somatic mosaicism.2012
Author(s)
Yabe M, Shimizu T, Morimoto T, Koike T, Takakura H, Tsukamoto H, Muroi K, Oshima K, Asami K, Takata M, Yamashita T, Kato S, Yabe H.
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Journal Title
Pediatr Transplant.
Volume: 4
Pages: 340-5.
DOI
Peer Reviewed
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[Journal Article] Histone chaperone activity of Fanconi anemia proteins, FANCD2 and FANCI, is required for DNA crosslink repair.2012
Author(s)
Sato K, Ishiai M, Toda K, Furukoshi S, Osakabe A, Tachiwana H, Takizawa Y, Kagawa W, Kitao H, Dohmae N, Obuse C, Kimura H, Takata M, Kurumizaka H.
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Journal Title
EMBO J.
Volume: 31
Pages: 3524-36.
DOI
Peer Reviewed
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[Journal Article] A ubiquitin-binding protein, FAAP20, links RNF8-mediated ubiquitination to the Fanconi anemia DNA repair network.2012
Author(s)
Yan Z, Guo R, Paramasivam M, Shen W, Ling C, Fox D 3rd, Wang Y, Oostra AB, Kuehl J, Lee DY, Takata M, Hoatlin ME, Schindler D, Joenje H, de Winter JP, Li L, Seidman MM, Wang W
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Journal Title
Mol Cell.
Volume: 47
Pages: 61-75
DOI
Peer Reviewed
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