2013 Fiscal Year Annual Research Report
自己抗原複合体ユニットを利用するテーラーメイド抗体産出系の作成
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23657087
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| Research Institution | Niigata University |
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Principal Investigator |
内海 利男 新潟大学, 自然科学系, 教授 (50143764)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
伊東 孝祐 新潟大学, 自然科学系, 助教 (20502397)
青柳 豊 新潟大学, 医歯学系, 教授 (00142266)
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| Keywords | 国際情報交換、香港 / リボソーム / 抗P自己抗体 / 自己抗原 / P蛋白質 / 自己免疫 / 抗原抗体反応 / P1/P2 |
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| Research Abstract |
本研究はリボソームの一部の自己抗原部位（ストーク複合体）の構造と抗原性との関係を探り、新規抗体作成系開発の手がかりを得ることを目的としている。平成25年度は以下の研究に取り組み一定の成果が得られた。
1）新たな抗体産出系構築に向けた抗原サンプル設計と免疫化：P1/P2自己抗原の古細菌相同タンパク質であるaP1が4量体を形成すること、およびこれに対しウサギを免疫化したところ保存されたそのＣ末端配列に対して抗体が産出されることが判明した。この結果より古細菌の(aP1)4-四量体が、動物細胞のP0-P1-P2五量体より簡単に作製できる新たな抗原母胎になりうることを示す知見が得られた。そこで、aP1のＣ末端配列を動物のリボソームタンパク質S6のＣ末端配列と置換し、ウサギを免疫化した結果、S6抗体の産生を確認することができた。
2）抗P FabとC末端ペプチド複合体の結晶構造解析：ここまでの研究で得られている抗Pモノクローナル抗体（IgG）をパパイン処理してFabを調製し、ヒトP0/P1/P2の共通C末端部位の22アミノ酸からなる合成ペプチドと混合し各種条件で結晶化を試みた。その結果、リン酸化型ペプチドとFabを混合した場合により良質の結晶が得られている。目下条件の精密化を行っている。
3）P0/P1/P2のリン酸化による抗P抗体結合性への効果：大腸菌で発現し再構成したP1-P2二量体とこれをカゼインキナーゼでリン酸化したP1-P2二量体とで抗P抗体との結合性を比較した結果、リン酸化による抗P抗体作用のわずかな増強が見られ、抗体認識へのリン酸化の効果が示された。
4）P1/P2のN末ドメインとC末端抗原部位を繋ぐリンカー部位（ヒンジ領域）の抗体結合性への寄与：Ｎ末端と抗Ｐエピトープが部位を繋ぐヒンジ領域を除いたP1とP2変異体を調製したが抗Ｐとの結合性の分析までには至らなかった。
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[Journal Article] Solution structure of human P1-P2 heterodimer provides insights into the role of eukaryotic stalk in recruiting the ribosome-inactivating protein trichosanthin to the ribosome2013
Author(s)
Lee, K.M., Yusa, K., Chu, L.O., Yu, C.W., Oono, M., Miyoshi, T., Ito, K., Shaw, P.C., Wong, K.B., and Uchiumi, T
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Journal Title
Nucleic Acids Res
Volume: 41
Pages: 8776-8787
DOI
Peer Reviewed
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[Presentation] The ribosome has multiple “arm-like” structures to catch translation factors2013
Author(s)
Uchiumi, T., Baba, K., Onozuka, M., Honda, T., Nomura, N., and Yao, M.
Organizer
International Conference on Nucleic Acid Enzymes and Enzymes in Human Diseases
Place of Presentation
The Chinese University of Hong Kong, Hong Kong
Year and Date
20130616-20130621
Invited
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