食品中の非変異原性発がん化合物による薬物代謝酵素のエピジェネティク制御

2011 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 23658116
• Research Institution: Kobe University
• Principal Investigator: 今石 浩正 神戸大学, 学内共同利用施設等, 教授 (50223318)
• Project Period (FY): 2011-04-28 – 2014-03-31
• Keywords: P450 / エピジェネティクス

Research Abstract

DNAメチル化の影響を調べる予備実験とした、ヒト培養細胞へと食品由来の非変異原性発がん物質を添加する際の負荷量決定した。イソチオシアネ-ト、ヒドロキノンおよびピロリジンアルカロイドを、申請者の所属する研究室で保持している腸管表皮細胞由来のCaCo2細胞および肝臓由来のHepG2細胞へと添加し、様々な非変異原性発がん物質存在下における細胞増殖曲線を書くことにより、細胞増殖に影響を与えない各化合物の最大負荷量を決定できた。

Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

DNAメチル化の影響を調べる予備実験し、イソチオシアネ-ト、ヒドロキノンおよびピロリジンアルカロイドを、申請者の所属する研究室で保持している腸管表皮細胞由来のCaCo2細胞および肝臓由来のHepG2細胞へと添加し、様々な非変異原性発がん物質存在下における細胞増殖曲線を書くことにより、細胞増殖に影響を与えない各化合物の最大負荷量を決定できた。本結果は、次度以降のエピジェネティック解析の基礎となる結果であると考えられる。

Strategy for Future Research Activity

本研究で明らかになった条件下で、イソチオシアネ-ト、ヒドロキノンおよびピロリジンアルカロイドを各々添加したCaCo2細胞およびHepG2細胞から、定法に従いゲノムDNAを回収する。ヒトがん関連薬物代謝・薬物活性化酵素P450のメチル化領域をスクリーニングする目的で、メチル化感受性制限酵素によるDNA消化実験を行う。次に、15種の主要ヒト薬物代謝型P450（CYP１A1、CYP1A2、CYP2A6、CYP2A13、CYP2B6、CYP2C8、CYP2C9、CYP2C18、CYP2C19、CYP2D6、CYP2E1、CYP2F1、CYP3A4、CYP3A5およびCYP3A7）について、各々のプロモーター領域2kbpとP450遺伝子を含むゲノム領域を増幅可能なPCRプライマーを作製する予定である。

Expenditure Plans for the Next FY Research Funding

消耗品代として、遺伝子組み換え用試薬、一般試薬類を購入する予定である。また、国内学会発表経費として、学会参加費と旅費を計上する。

Research Products

• [Journal Article] Photo-regulation of cytochrome P450 activity by using caged compound (2012)
  • Author(s): Morigaki,K.,Mizutani,K.,Kanemura,E.,Tatsu,Y.,Yumoto,N.,Imaishi,H.
  • Journal Title: Anal. Chem. Volume: 84 Pages: 155-160
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Metabolism of the herbicides chlorotoluron, diuron, linuron, simazine,and atrazine by CYP1A9 and CYP1C1 from Japanese eel (Anguilla japonica) (2011)
  • Author(s): Uno,T.,Kajia,S.,Goto,T.,Imaishi, H.,
  • Journal Title: Pesticide Biochemistry and Physiology Volume: 101 Pages: 93-102
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Vertically integrated human P450 and oxygen sensing film for the assays of P450 metabolic activities (2011)
  • Author(s): Chang,G.,Morigaki,K.,Tatsu,Y.,Hikawa,T.,Goto,T.,Imaishi,H.
  • Journal Title: Anal. Chem. Volume: 83 Pages: 2956-2963
  • Peer Reviewed
• [Presentation] 食品の安全性評価用バイオセンシングシステムの開発 (2012)
  • Author(s): 今石浩正、森垣憲一、後藤達志、森大気
  • Organizer: 日本農芸学会2012年度大会(招待講演)
  • Place of Presentation: 京都
  • Year and Date: 2012.3.25
• [Presentation] 食品添加物の安全性評価への大腸菌発現ヒトP450酵素の利用 (2012)
  • Author(s): 後藤達志、森大気、三木悠、今石浩正
  • Organizer: 日本農芸学会2012年度大会
  • Place of Presentation: 京都
  • Year and Date: 2012.3.24
• [Presentation] 改変変異原生試験を用いた食品成分の安全性評価研究 (2011)
  • Author(s): 森大気、三木悠、松井悠紀、後藤達志、今石浩正
  • Organizer: 第84回日本生化学会大会
  • Place of Presentation: 京都
  • Year and Date: 2011.9.24
• [Presentation] ヒトシトクロム２Ｂ６によるクロルピリホスの代謝活性化に見られる遺伝子多型の影響 (2011)
  • Author(s): 後藤達志、森大気、八田真衣、松井麻記、今石浩正
  • Organizer: 第84回日本生化学会大会
  • Place of Presentation: 京都
  • Year and Date: 2011.9.22
• [Presentation] 微生物変換へ応用可能なキメラＰ４５０酵素の作製と機能解析 (2011)
  • Author(s): 八木光彦、滝川浩郷、佐々木満、今石浩正
  • Organizer: 第84回日本生化学会大会
  • Place of Presentation: 京都
  • Year and Date: 2011.9.22
• [Presentation] NADPH―シトクロムP450還元酵素の遺伝子多型によるCYP3A4の代謝活性変化 (2011)
  • Author(s): 坂口正和、後藤達志、今石浩正
  • Organizer: 第84回日本生化学会大会
  • Place of Presentation: 京都
  • Year and Date: 2011.9.22
• [Presentation] Metablic activation of food-composition by human P450 variants representing single nucleotide polumorphisms (2011)
  • Author(s): Imaishi,H.,Goto,T.,Mori,T.,Hikawa,T.,Hatta,M.,Matui,M.
  • Organizer: 36ｔｈ FEBS CONGRESS
  • Place of Presentation: イタリア
  • Year and Date: 2011.6.26
• [Presentation] Metabolism and Medabolic Activation of Food-composition by Human P450 Variants Representing Single Nucleotide Polymorphisms (2011)
  • Author(s): Imaishi,H.,Goto,T.,Mori,T.,Hatta,M.,Matui,M.,Hikawa,T.
  • Organizer: 17th North American Regional ISSX Meeting
  • Place of Presentation: アトランタ
  • Year and Date: 2011.10.17