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2011 Fiscal Year Annual Research Report

ラパマイシンで惹起されない新しいオートファジー機構を用いた新規薬剤スクリーニング

Research Project

Project/Area Number 23659036
Research InstitutionKyoto University

Principal Investigator

小堤 保則  京都大学, 生命科学研究科, 教授 (70205425)

Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) 山銅 ゆかり  京都大学, 生命科学研究科, 教務職員 (70359785)
Project Period (FY) 2011-04-28 – 2012-03-31
Keywordsオートファジー / ラパマイシン / 酵母 / Ypk1 / スクリーニング / セリン・スレオニンキナーゼ
Research Abstract

申請者らは、窒素源飢餓によるオートファジー誘導系に、ラパマイシンで惹起される経路の他に、惹起されない経路があることを見いだしたさらに、後者の経路もラパマイシン惹起され経路と同程度に飢餓応答に必要な経路であることを明らかにした。ラパマイシンが免疫抑制剤、抗ガン剤さらには寿命を延ばす薬剤としても注目を集めていることから、本研究では、後者のオートファジーを惹起する物質も同様に有用なものであると考え、この物質を、新しいオートファジー機構を利用してスクリーニングする系の開発を行うために、以下の2点について研究した。
(1)薬剤スクリーニング系の確立を目指した研究
ラパマイシンで模倣できない新しいオートファジー経路で分解されるタンパク質として酵母の細胞質にあるYpk1に注目し、蛍光タンパク質との融合タンパク質を発現させ顕微鏡で観察できる系を確立した。主要な液胞(哺乳動物のリソソーム)のタンパク分解酵素を欠損させた細胞を使うことにより、薬剤添加時に、このオートファジー経路が活性化されれば、融合タンパク質が細胞質から液胞に運ばれるため、脂肪質の蛍光強度が減少し、液胞の蛍光強度がすることが判定できる。また、適当なYpk1の断片を使うことにより、より一層観察しやすい系を確立した。また、簡便な系としては野生株を用いてSDS-PAGE後に、western blotを行い、分解の有無で判断するシステムを確立した。
(2)セリン/スレオニンキナーゼ欠損のスクリーニング
ラパマイシンで惹起されない経路に於ける、Ypk1の上流のキナーゼがTOPC1と同様、セリン/スレオニンキナーゼであると仮定して、セリン/スレオニンキナーゼ欠損株のスクリーニングを行った。その結果、ある種のセリン/スレオニンキナーゼがin vivoあるいはin vitroにおいてもYpk1をリン酸化することを見出した。

  • Research Products

    (6 results)

All 2012 2011

All Journal Article (3 results) (of which Peer Reviewed: 3 results) Presentation (2 results) Book (1 results)

  • [Journal Article] CD22 serves as a receptor for soluble IgM2012

    • Author(s)
      Adachi T, Harumiya S, Takematsu H, Kozutsumi Y, Wabl M, Fujimoto M, Tedder TF
    • Journal Title

      Eur J Immunol

      Volume: 42(1) Pages: 241-247

    • DOI

      doi:10.1002/eji.201141899

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Induction of feline immunodeficiency virus from a chronically infected feline T-lymphocyte cell line2012

    • Author(s)
      Tochikura TS, Naito Y, Kozutsumi Y, Hohdatsu T
    • Journal Title

      Res Vet Sci

      Volume: 92(2) Pages: 327-32

    • DOI

      doi:10.1016/j.rvsc.2011.02.013

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Quantitative transcriptomic profiling of branching in a glycosphingolipid biosynthetic pathway2011

    • Author(s)
      Takematsu H, Yamamoto H, Naito-Matsui Y, Fujinawa R, Tanaka K, Okuno Y, Tanaka Y, Kyogashima M, Kannagi R, Kozutsumi Y
    • Journal Title

      J Biol Chem

      Volume: 286(31) Pages: 27214-27224

    • DOI

      doi:10.1074/jbcM111.234526

    • Peer Reviewed
  • [Presentation] Involvement of sphingolipids in phosphorylation and degradation of Ypk1 in the stress response of Yeast2011

    • Author(s)
      Y.Kozutsumi M.Tomioka, M.Shimobayashi, Y.Yamane, H.Takematsu
    • Organizer
      The 31st NAITO conference on Glycan empression and regulation [II]
    • Place of Presentation
      Sapporo(招待溝演)
    • Year and Date
      2011-09-14
  • [Presentation] スフィンゴ脂質とESCRT複合体が関与するYpk1の窒素源飢餓による分解2011

    • Author(s)
      下林貢、富岡真、山根ゆかり、竹松弘、小堤保則
    • Organizer
      第53回日本脂質生化学会
    • Place of Presentation
      東京
    • Year and Date
      2011-05-13
  • [Book] スフィンゴ脂質が関わる免疫抑制とシグナル伝達(化学と生物49(05))2011

    • Author(s)
      竹松弘, 小堤保則
    • Total Pages
      328-334
    • Publisher
      日本農芸化学会

URL: 

Published: 2013-06-26  

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