ハダカデバネズミの寿命はなぜ１０倍長いのか？ー抗酸化制御に関する遺伝子の単離ー

2012 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 23659163
• Research Institution: Waseda University
• Principal Investigator: 寺田 泰比古 早稲田大学, 理工学術院, 教授 (40212063)
• Keywords: 抗老化遺伝子 / 発現クローニング / 遺伝子ライブラリー / ハダカデバネズミ

Research Abstract

1）ハダカデバネズミ(Hg)のレトロウイルスcDNAライブラリーの作製：
Hgの生後､1-2週間後の個体から、脳、肝臓を採取し、RNAを精製後、Oligo(dT)をアニールし逆転写酵素によって1st strand cDNAを合成し、PCR反応にて二本鎖cDNAを合成した。PMXsレトロウイルスベクターにcDNAを挿入し、大腸菌に形質転換し､cDNAライブラリーを作製した。作製したcDNAライブラリーを、レトロウイルス産生細胞であるPlat-E細胞に遺伝子導入し、2日後に培養上清を採取することでウイルス化した。
2）発現クローニングによる遺伝子スクリーニング：
マウス胎児繊維芽細胞(MEF)に遺伝子ライブラリーを導入し、クライシスを超えて増殖が停止せず増殖し続ける細胞コロニーを単離した。また、Hgは癌遺伝子に対して強い抵抗性を示すことから、Hgの癌抑制遺伝子を単離する目的で、v-Rasで癌化したNIH3T3細胞に導入し、癌形質を消失させる遺伝子の単離を行った。Cre-loxPシステムで、Cre遺伝子を細胞に導入することによって、非特異的な細胞株を排除した。これらの細胞クローンからゲノムを回収し、PCR法にて、cDNAを増幅し遺伝子配列を決定した。
3）上記２のスクリーニングで、細胞老化を抑制するHg由来の遺伝子は現在のところ単離されていないが、癌形質を強く抑制する遺伝子は2個単離し、そのうちの１つはホモロジー検索からHgのVimentinであることがわかった。Vimentinは間葉系に特異的な中間径フィラメントであるが、マウス由来のVimentinと比較し、なぜ、HgのVimentinが強い癌抑制効果を持つのかを今後明らかにしていく。