ＲＮＡウイルスゲノムの品質管理機構に関する基礎的研究

2011 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 23659228
• Research Institution: Hamamatsu University School of Medicine
• Principal Investigator: 鈴木 哲朗 浜松医科大学, 医学部, 教授 (00250184)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 伊藤 昌彦 浜松医科大学, 医学部, 助教 (50385423)
• Project Period (FY): 2011-04-28 – 2013-03-31
• Keywords: 国際情報交流 / 米国、欧州諸国

Research Abstract

HCVゲノムRNAの両末端に存在する非翻訳領域（5'UTR、3'UTR）はウイルスRNAの安定性の制御に関与する可能性が高い。本研究では、そのうちまず3'UTR領域に注目し、ヒト肝癌細胞株Huh7のcrude S10分画と合成HCV RNAを用いて結合する細胞タンパク質の探索を試みたが現在まで新規結合因子は同定されていない。一方、5'UTRについて、stem-loop領域内のIIId配列のHCV RNA合成し選択的に結合する蛋白の同定を行った。結合タンパク質群のうちで、同配列によってcompeteされないもの、および相補鎖配列にも結合の認められたものを排除したところ、6種類（40-, 46-, 52, 63-, 66-, 90-kDa）の特異性の高い結合タンパク質が得られた。これらについて質量分析を行ったところ、3種類についてタンパク質同定することができた。これらは、これまでにHCV RNAとの結合について報告されていない新規分子であった。

Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

HCV RNA UTR領域に結合する新規宿主因子を複数種類同定することができており、概ね順調に進展していると考えられる。

Strategy for Future Research Activity

同定したHCV RNA結合因子が、HCV RNAの安定性制御、HCV RNA複製に及ぼす影響を明らかにする。

Expenditure Plans for the Next FY Research Funding

培養細胞系での遺伝子導入、ノックダウン実験等の分子生物学的解析に必要な試薬、消耗品を主として購入する。研究成果発表、情報収集のため、学会参加を予定しており、そのための旅費として一部使用する。

Research Products

• [Journal Article] Visualization and measurement of ATP levels in living cells replicating hepatitis C virus genome RNA. (2012)
  • Author(s): Ando T, Imamura H, Suzuki, Aizaki H, Watanabe T, Wakita T, Suzuki T.
  • Journal Title: PLoS Pathogen Volume: 8 Pages: e1002561
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Role of the ERAD pathway in degradation of hepatitis C virus envelope proteins and production of the viral particles. (2011)
  • Author(s): Saeed M, Suzuki R, Watanabe N, Masaki T, Tomonaga M, Muhammad A, Kato T, Matsuura Y, Watanabe H, Wakita T, Suzuki T.
  • Journal Title: Journal of Biological Chemistry Volume: 286 Pages: 37264-37273
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Structural requirements of virion-associated cholesterol for infectivity, buoyant density and apolipoprotein association of hepatitis C virus. (2011)
  • Author(s): Yamamoto M, Aizaki H, Fukasawa M, Teraoka T, Miyamura T, Wakita T, Suzuki T.
  • Journal Title: Journal of General Virology Volume: 92 Pages: 2082-2087
  • Peer Reviewed
• [Presentation] Identification of lipid droplet-associated membrane proteins that are involved in HCV production (2011)
  • Author(s): Aizaki H, Matsumoto Y, Goto K, Watashi K, Suzuki R, Fukasawa M, Hanada K, Sato S, Takahashi N, Matsuura Y, Motojima K, Miyamura T, Suzuki T, Wakita T.
  • Organizer: 18th International Symposium on Hepatitis C Virus and Related Viruses
  • Place of Presentation: 米国シアトル
  • Year and Date: 2011年9月10日