2012 Fiscal Year Annual Research Report
人工遺伝子（ｃｏｄｏｎ改変機能ドメイン重合分子）を発現するブタの作出
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23659612
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| Research Institution | Osaka University |
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Principal Investigator |
宮川 周士 大阪大学, 医学(系)研究科(研究院), 准教授 (90273648)
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| Keywords | 遺伝子構築 / nsulin promoter / C1-INH / Thrombomodulin / DAF / MCP / 胚移植試験 / 顕微授精 |
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| Research Abstract |
＜マウスでの発現＞旧来のpCPI/CTDMAおよびpCX/HLA-EをマウスにTGし、それぞれ4匹、2匹のlineを得た。内、2匹,1匹の発現を生後８週令でRT-PCRで解析した（膵臓での発現を1とした）。 *CTDM#1：腦（5.41）、心（0.19）、肺（1.17）、胸腺（0.30）、肝（0.06）、腎（0.13）、腸（0.39）、脾(1.61)、膵（1）*CTDM#2：心（2.45）、肺（7.29）、胸腺（9.25）、肝（0.03）、腎（0.71）、脾(14.25)、膵（1） *HLA-E：腦（2.75）、心（70.71）、肺（15.48）、胸腺（0.17）、肝（0.36）、腎（1.28）、腸（0.30）、脾(2.81)、筋（12.86）、膵（1）であった。 両方のpromoterで膵臓での発現を確かめたが、pCPIの方が相対的に高発現と考えられた 新規に遺伝子構築を作製した。* pCPI(pig insulin promoter + CMV enhancer)/NCTDM ： C1-INH - Thrombomodulin - DAF - MCP ---昨年のCTDMを改良した。さらに、NK細胞制御 pCAGGS/HLA-Ev(147)-2A-hβ2m <N-HLA-E>：IRESをやめ2Aで繋いだ。 ＜ブタでの発現＞NCTDMおよびHLA-Ev遺伝子両者ともに、1.25ng/μlでは2.5ng/μlに比してより高い胚盤胞形成率が得られる傾向であった。一方、胚盤胞の遺伝子導入効率については、両区に差は見られなかった。 胚移植試験には、発生率が高い傾向であった1.25ng/μlのDNA濃度を採用した。NCTDM遺伝子およびHLA-Ev遺伝子を導入した顕微授精胚、それぞれ 69個および79個を2頭のレシピエントブタに移植した。しかし、TG-ブタは得られなかった。
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[Journal Article] A cloning of cytidine monophospho-N-acetylneuraminic acid hydroxylase from porcine endothelial cells.2012
Author(s)
Ikeda K, Yamamoto A, Nanjo A, Inuinaka C, Takama Y, Ueno T, Fukuzawa M, Nakano K, Matsunari H, Nagashima H, Miyagawa S
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Journal Title
Transplant Proc
Volume: 44
Pages: 1136-8
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