2013 Fiscal Year Research-status Report
正常と腫瘍性の子宮平滑筋幹細胞の単離と両者の比較解析：新規治療法の開発に向けて
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23659776
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| Research Institution | Shinshu University |
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Principal Investigator |
佐野 健司 信州大学, 医学部附属病院, 講師 (50205994)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
林 琢磨 信州大学, 医学部, 准教授 (60359726)
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| Keywords | Cancer stem cell / Side population / Main population / Leiomyosarcoma / Leiomyoma |
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| Research Abstract |
手術的に採取されたヒト子宮正常平滑筋組織、または子宮平滑筋腫さらに子宮平滑筋肉腫から組織片を分離して、物理的(鋏でできる 限り細かく切り刻む）、酵素的（コラーゲナーゼtype IV 0.2%とDNase I 0.05%)に消化分離後、平滑筋細胞の培養を試みた。10%FBS+D MEMで10日から2週間培養後にはαSMA陽性かつcalponin陽性の純度の高い平滑筋細胞が得られた。この細胞をレゼルピン、あるいはベラパミル存在化のヘキスト染色で、SP, MPの分離を試みたところ、幹細胞が多く含まれるとされるSP分画が得られた。SPに対するMPのsurvivin1の発現は著増しており、MPはG2/M期を支持しているものと考えられた。初期培養を省略して、平滑筋組織を同様な方法で物理的、酵素的に分離して、単細胞化した直後に、SP, MPの分離も可能であった。しかしながら、両方法ともに分取後の間葉系細胞stem cell用培養試薬では低酸素状態で充分な増殖が得られなかった。同じ材料を使用して、間葉系幹細胞のマーカーとされるCD271の発現も併せて検討した。FACS解析では、数パーセントの割合でCD271陽性細胞が含まれていたが、SP分画と必ずしも一致したものではなく、CD271がstem cellの主分画とは考え難かった。次にSP分画及びMP分画の細胞(1x10の5乗～2x10の5乗個)をNOD-SCIDマウス1匹ずつの副乳頭に移植したが、明かなマウスへの腫瘍生着を確認出来なかった。次年度の課題として、幹細胞の増殖がより早く進むように、SPの細胞量を増やすため、最初の組織量をできるだけ増量して、実験を試みるようにしたい。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
4: Progress in research has been delayed.
Reason
人体材料を扱うため、手術日程との調整や採取量の制約があり、実験回数が限定され、条件検討のための充分量の検体が得られていない。子宮平滑筋肉腫については、少ない頻度のため、一度実験に使用したのみである。 ある程度の培養条件の検討が終了したので、今後、採取量が充分確保可能な平滑筋腫材料で、最終的な至適条件を決定して、平滑筋幹細胞の増殖、遺伝子精製を行っていく。
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| Strategy for Future Research Activity |
（今後の推進方策）
1)検体量が充分に確保可能な平滑筋腫材料を使用して、ヘキスト染色によるSP, MPの分離、 2)分取後、一定の増殖をさせた後、間葉系多分化能の検定を行う。 3)培養条件が安定的に設定できた後に、増殖させた平滑筋腫、正常平滑筋、平滑筋肉腫の幹細胞の遺伝子を精製する。 4)マイクロアレイ解析を行う。
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| Expenditure Plans for the Next FY Research Funding |
平成25年度は、正常子宮平滑筋、子宮平滑筋腫、子宮平滑筋肉腫の3種類の材料により比較発現解析を行う予定であったが、稀少臨床検体の関係で充分量の子宮平滑筋肉腫材料が採取できず、比較発現解析ができない状況となり、未使用分が発生した。
できる限り同一症例で、正常子宮平滑筋、子宮平滑筋腫、子宮平滑筋肉腫の3種類の材料からのSP, MP分画を採取した上で、total RNAを精製し、mRNAの発現解析を行う。未使用額はそのための、培養やRNA抽出、マイクロアレイ解析の経費に充てることとしたい。実験計画の手順として、1) 正常子宮平滑筋、子宮平滑筋腫、子宮平滑筋肉腫の3種類の材料からのSP, MP分画を採取する。2) それぞれの分画の細胞を培養により増殖させる。3) それぞれの分画の細胞のmRNAの抽出する。4) マイクロアレイ解析を行う。
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[Journal Article] Proteasome Subunit LMP2/ β1i As a Biomarker for Human Uterine Mesenchymal Tumors.2013
Author(s)
Hayashi T, Horiuchi A, Sano K, Gur G, Aburatani H, Ishiko O, Yaegashi N, Shiozawa T, Kanai Y, Zharhary D, Tonegawa S, Konishi I.
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Journal Title
J Oncobiomarkers
Volume: 1
Pages: 1-6
Peer Reviewed
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[Journal Article] Differential expression of LMP2/β1i: as a potential biomarkeral of human uterine mesenchymal tumors.2013
Author(s)
Hayashi T, Horiuchi A, Sano K, Gur G, Aburatani H, Ishiko O, Yaegashi N, Kanai Y, Zharhary D, Tonegawa S, Konishi I.
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Journal Title
J Interdisciplinary Histopathology
Volume: 1
Pages: 153-159
DOI
Peer Reviewed
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[Journal Article] Tumor escape of uterine leiomyosarcoma from immune surveillance in the female genital system.2013
Author(s)
Hayashi T, Horiuchi A, Sano K, Hiraoka N, Ichimura T, Ishiko O, Kanai Y, Yaegashi N, Aburatani H, Shiozawa T, Tonegawa S, Konishi I.
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Journal Title
Current Res. Immunol.
Volume: 7
Pages: 13-25
Peer Reviewed
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[Journal Article] The proteasome subunit LMP2/β1i in the female genital system.2013
Author(s)
Hayashi T, Horiuchi A, Sano K, Gur G, Aburatani H, Ichimura T, Yaegashi N, Kanai Y, Zharhary D, Tonegawa S, Konishi I.
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Journal Title
Journal Gynecology Obstetrics
Volume: 1
Pages: 1-6
DOI
Peer Reviewed
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[Journal Article] Association of proteasome subunit LMP2/β1i with the development of human uterine mesenchymal tumors.2013
Author(s)
Hayashi T, Horiuchi A, Sano K, Hiraoka N, Ichimura T, Ishiko O, Kanai Y, Yaegashi N, Aburatani H, Shiozawa T, Tonegawa S, Konishi I.
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Journal Title
Current Res. Cancer.
Volume: 2
Pages: 1-6
Peer Reviewed
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