2012 Fiscal Year Annual Research Report
改良型シグナルシークエンストラップ法による雌性生殖器幹細胞の新規蛋白質の探索
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23659783
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| Research Institution | Keio University |
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Principal Investigator |
丸山 哲夫 慶應義塾大学, 医学部, 講師 (10209702)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
内田 浩 慶應義塾大学, 医学部, 助教 (90286534)
升田 博隆 慶應義塾大学, 医学部, 助教 (80317198)
山崎 彰子 慶應義塾大学, 医学部, 研究員 (60528777)
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| Keywords | 子宮 / 幹細胞 / 抗体 / 蛋白 |
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| Research Abstract |
本研究ではヒトの子宮内膜および子宮筋などの幹細胞の表面マーカーならびに分泌蛋白を同定しこれらを指標にしてヒト雌性生殖器官の成体幹細胞の特性と機能を明らかにすることを目的とする。そのためにシグナルシークエンストラップ法（SST-REX法）を用いる戦略とした。その出発材料となる幹細胞と非幹細胞を明確に異なる集団として分離することが本研究の成否を決するため、昨年度に引き続き幹細胞特性をin vivoで確認するシステムの最終的な確立を目指した。その結果、重度免疫不全マウスを用いたヒト子宮内膜再構成系とレンチウイルスによる細胞標識・細胞追跡法を組み合わせることで多分化能を指標にしたin vivoヒト子宮内膜幹細胞アッセイ系を確立し、論文として発表した（Miyazaki, et al., PLoS ONE, 2012）。これにより少なくとも現時点では内膜side population (SP)細胞が内膜幹細胞の最有力候補集団と考えられた。そこで、SST-REX法を用いるべく、内膜SP細胞からのRNA抽出を行った。しかし摘出ヒト子宮全体の内膜に占める内膜SP細胞の割合は約2％であり、さらにSP細胞はG0期といった静止期に留まっているために内膜SPのRNA量は少ない。従って、摘出ヒト子宮全体の内膜SPからは総量で高々500ng程度しか抽出できないことが判明した。一方、SST-REX法には約5μgの高品質のRNAが必要となる。良好なヒト検体と高品質のRNAを十分な数だけ得るのは限られた期間の中では困難であることを再認識したうえで、約5μgの高品質のRNAを得るべく、最終年度はRNAサンプルの蓄積を継続的に行った。さらに、手術検体回収システムの見直しに加えて、SP細胞分離法やRNA抽出法などの条件設定や改良・改善を行い、最終目標であるSST-REX法へ応用し得る基盤技術と基盤知見が得られた。
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Research Products
(24 results)
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[Journal Article] β-catenin signaling regulates Foxa2 expression during endometrial hyperplasia formation.2012
Author(s)
Villacorte MD, Suzuki K, Hirasawa A, Ohkawa Y, Suyama M, Maruyama T, Aoki D, Ogino Y, Miyagawa S, Terabayashi T, Tomooka Y, Nakagata N, Yamada G
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Journal Title
Oncogene.
Volume: -
Pages: -
DOI
Peer Reviewed
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[Journal Article] Psychological adjustment and psychosocial stress among Japanese couples with a history of recurrent pregnancy loss.2012
Author(s)
Kagami M, Maruyama T, Koizumi T, Miyazaki K, Nishikawa-Uchida S, Oda H, Uchida H, Fujisawa D, Ozawa N, Schmidt L, Yoshimura Y
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Journal Title
Hum Reprod.
Volume: 27
Pages: 787-794
DOI
Peer Reviewed
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[Presentation] [第20回日本胎盤学会相馬賞受賞]Characterization of sodium dependent betaine uptake in human placental brush-border membranes.2012
Author(s)
Hiromi Eguchi, Masatoshi Tomi, Tomohiro Nishimura, Kenji Oda, Mai Yamazaki, Risa Yagi, Mariko Usuda, Kei Higuchi, Tetsuo Maruyama, Emi Nakashima
Organizer
18th International Federation of Placenta Association Meeting(IFPA).
Place of Presentation
Hiroshima, Japan.
Year and Date
20120918-20120921
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[Presentation] Examining the role of SLC10A3 in the placenta.2012
Author(s)
Tomohiro Tawara, Tomohiro Nishimura, Masatoshi Tomi, Mai Yamazaki, Rina Matsushita, Kei Higuchi, Tetsuo Maruyama, Emi Nakashima
Organizer
18th International Federation of Placenta Association Meeting(IFPA).
Place of Presentation
Hiroshima, Japan.
Year and Date
20120918-20120921
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[Presentation] Thioredoxin, a small redox protein, in ovarian follicles of women undergoing IVF-ET.2012
Author(s)
Ikuko Kishi, Tetsuo Maruyama, Miho Ohishi, Ysuo Akiba, Hironori Asada, Yasuhiro Konishi, Masao. Nakano, Kiyoshi Kamei, Yasunori Yoshimra
Organizer
28th Annual Meeting of European Society of Human Reproduction and Embryology(ESHRE).
Place of Presentation
Istanbul, Turkey
Year and Date
20120701-20120704
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