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2011 Fiscal Year Research-status Report

骨形成活性を有する新規ペプチドの創生:ペプチドのRANKL結合部位の同定

Research Project

Project/Area Number 23659867
Research InstitutionTokyo Medical and Dental University

Principal Investigator

青木 和広  東京医科歯科大学, 医歯(薬)学総合研究科, 准教授 (40272603)

Project Period (FY) 2011-04-28 – 2013-03-31
Keywords骨形成促進 / ペプチド / RANKL / 逆シグナル / NMR / 結晶構造解析
Research Abstract

本研究は、骨芽細胞上に発現するRANKL分子と結合する骨形成促進ペプチドと骨形成促進しないペプチドとの結晶構造解析情報を比較検討する事により、骨形成を促進するRANKL上の特異的ペプチド結合部位を見出し、その部位より新規ペプチドの設計およびその骨形成促進能力を評価するという研究である。 骨形成促進するペプチドと骨形成促進しないペプチドは、同じ9つのアミノ酸から構成されるW9ペプチドを異なる溶媒にとかしたものを研究を開始した当初は用いていた。溶媒をアルカリ性にしたペプチド(pH12)は骨形成が促進され、中性に近い溶媒を用いたペプチドは骨形成を促進しなかったため、結晶構造解析に先立ち、まずNMR(核磁気共鳴)を用いてペプチドの状態を解析した。骨形成促進するペプチドの分子凝集しており、逆に骨形成を促進しないペプチド分子は逆に凝集していないということが明らかとなった。この凝集しているという結果の解釈は、目に見える凝集反応ではないが、何らかの分子の塊構造が骨芽細胞上のRANKL同士の橋渡し構造を作り、逆シグナルを入れたのではないかという解釈もできるが、結論的に、ペプチドの溶かし方によって骨形成促進する理由は、NMR解析ではみつからなかった。 同時に進めていたスクリーニングテストにより、9つのアミノ酸で構成されるW9ペプチドよりも11のアミノ酸で構成されるOP3-4ペプチドの方が、同じ環状ペプチドでありながら、in vitroにおける骨芽細胞分化促進能および頭頂骨骨欠損モデルにおける骨新生能の両方において2倍の骨形成促進作用を有することを発見した。この両者ともRANKL分子に結合することから、このW9ペプチドとOP3-4ペプチドとの骨形成能力の差をRANKLとの結合部位の差として説明できるのではないかという仮説を立てた。

Current Status of Research Progress
Current Status of Research Progress

3: Progress in research has been slightly delayed.

Reason

当初予定していた骨形成促進ペプチドと骨形成を促進しないペプチドの差が、同じペプチドの異なる溶かし方によっており、NMR解析の結果から、骨形成促進するペプチドが凝集しており、骨形成を促進しないペプチドが凝集していないという結果となり、RANKLとの結合状態により骨形成促進能が変化するという仮説が正しいかどうか説明できない状態となったため。 (ここでいう、凝集とは、目に見える凝集ではなく、分子密度が高く折り重なっているという状態を示している。)

Strategy for Future Research Activity

研究実績の概要にも示したが、W9ペプチドよりも骨形成促進能を有するOP3-4ペプチドを発見し、この二つのペプチドが双方ともにRANKLに結合することから、W9ペプチドとOP3-4ペプチドとの骨形成能力の差をRANKLとの結合部位の差として説明できるかをまず、NMRを用いた解析により行う予定である。 そのためには、リコンビナントヒトRANKLを14Nを用いたタンパク発現系を構築し、RANKLとペプチドとの結合状態を検討、その後、結晶構造解析まで持っていく予定である。

Expenditure Plans for the Next FY Research Funding

ペプチドの合成費用、14Nを用いたリコンビナントヒトRANKLの合成および精製、連携研究者の大阪大学の中川敦史教授や研究協力者の池上貴久教授との打ち合わせ旅費、およびSpring8までの旅費、学会発表旅費など消耗品と旅費に主に使用する。

  • Research Products

    (14 results)

All 2012 2011

All Journal Article (4 results) Presentation (8 results) Book (1 results) Patent(Industrial Property Rights) (1 results) (of which Overseas: 1 results)

  • [Journal Article] Gingival Overgrowth Induced by Phenytoin-Study of the Human Gingival Overgrowth Tissues and Clonal Gingival Cells-.2012

    • Author(s)
      HAYASHI N, TAMURA Y, KUSUMOTO Y, SHIMOKAWA H, AOKI K, OHYA K, YAMAZAKI T, SHINOZUKA O
    • Journal Title

      Disability and Oral Health

      Volume: 33(1) Pages: pp16-25

  • [Journal Article] Defective nuclear factor-κB-inducing kinase in aly/aly mice prevents bone resorption induced by local injection of lipopolysaccharide.2011

    • Author(s)
      N. S. Soysa, N. Alles, M. Takahashi, A. Aoki, K. Ohya.
    • Journal Title

      J Periodont Res

      Volume: 46 Pages: pp280-284

  • [Journal Article] The tumor necrosis factor type 2 receptor plays a protective role in tumor necrosis factor-α-induced bone resorption lacunae on mouse calvatiae.2011

    • Author(s)
      K. Nagano, N. Alles, A. H. Mian, A. Shimoda, N. Morimoto, Y. Tamura, H. Shimokawa, K. Akiyoshi, K. Ohya, K. Aoki.
    • Journal Title

      J Bone Miner, Metab

      Volume: 29 Pages: pp671-681

  • [Journal Article] A novel underuse model shows that inactivity but not ovariectomy determines the deteriorated material properties and geometry of cortical bone in the tibia of adult rats.2011

    • Author(s)
      K. Miyagawa, Y. Kozai, Y. Ito, T. Furuhama, K. Naruse, K. Nonaka, Y. Nagai, H. Yamato, I. Kashima, K. Ohya, K. Aoki, Y. Mikuni-Takagaki.
    • Journal Title

      J Bone Miner Metab,

      Volume: 29 Pages: pp422-436

  • [Presentation] An antagonist of tumor necrosis factor-α stimulates bone formation under the lipopolysaccharide-induced inflammation in a murine tooth extraction model.TNF-a阻害剤はLPSによる炎症下で骨形成を促進する:マウス抜歯窩モデルにおける検討2012

    • Author(s)
      青木和広、中地浩之、Neil ALLES、永野健一、Masud KHAN、友松伸允、Ramanchandai MURALI、Hongtao Zhang、山城正司、Mark I. GREENE、田村幸彦、大谷啓一
    • Organizer
      第85回日本薬理学会年会
    • Place of Presentation
      京都
    • Year and Date
      2012年3月14日~16日
  • [Presentation] CHPナノゲルとラズベリー型CHPナノゲルをペプチド担体として用いた際の比較―低Ca食飼育マウスを用いた骨吸収抑制効果の検討―2011

    • Author(s)
      佐藤俊三、永野健一、田村幸彦、大谷啓一、青木和広.
    • Organizer
      第53回歯科基礎医学会学術大会
    • Place of Presentation
      岐阜
    • Year and Date
      2011年9月30日~10月2日
  • [Presentation] Both TNF-αand RANKL Antagonist Peptide Stimulates Bone Formation In TNF-aDeficient Mice to the Same Extent As In Wild Type Mice.2011

    • Author(s)
      KHAN M, ALLES N, Nagano K, Furuya Y, Yasuda H, Ohya K, Aoki K.
    • Organizer
      ASBMR2011
    • Place of Presentation
      San Diego, CA, USA
    • Year and Date
      2011年9月16日~20日
  • [Presentation] TNF-α非依存的に骨形成を亢進する.2011

    • Author(s)
      カーン・マスード、アレス・ニール、永野健一、古屋優里子、保田尚孝、大谷啓一、青木和広.
    • Organizer
      第29回日本骨代謝学会学術大会
    • Place of Presentation
      大阪
    • Year and Date
      2011年7月28日~30日
  • [Presentation] The stimulatory effects of TNF-α and RANKL antagonist peptide W9 on bone formation.2011

    • Author(s)
      M.KHAN、N.ALLES、永野健一、大谷啓一、青木和広
    • Organizer
      第31回日本骨形態計測学会
    • Place of Presentation
      岐阜
    • Year and Date
      2011年5月20日~22日
  • [Presentation] 顎骨内部の応力分析と組織形態評価の試み2011

    • Author(s)
      藤木健吾、青木和広、若林則幸、大谷啓一、五十嵐順正
    • Organizer
      日本補綴歯科学会、東京支部総会、第15回学術大会
    • Place of Presentation
      東京
    • Year and Date
      2011年11月26日
  • [Presentation] A Bone Resorption Inhibitor Promotes Bone Formation.2011

    • Author(s)
      M.KHAN, N.ALLES, A.Mamun, Y.FURUYA, H.YASUDA, J.PENNINGER, A.ARAI, M.NAKAMURA, T. MIZOGUCHI, N.TAKAHASHI, N.UDAGAWA, K.OHYA, K.AOKI.
    • Organizer
      第59回国際歯科研究学会日本部会(JADR)総会・学術大会
    • Place of Presentation
      広島
    • Year and Date
      2011年10月8日-9日
  • [Presentation] メカニカルストレスによる顎堤吸収とそのメカニズムに関する研究2011

    • Author(s)
      藤木健吾、青木和広
    • Organizer
      第76回口腔病学会学術大会
    • Place of Presentation
      東京
    • Year and Date
      20111209-10
  • [Book] 骨粗鬆症治療薬の最近の動向について2011

    • Author(s)
      大谷啓一、青木和広
    • Total Pages
      109-122
    • Publisher
      日本歯科評論
  • [Patent(Industrial Property Rights)] 新規な架橋構造を含むTNFレセプターループペプチドの模倣ペプチドを用いた医薬組成物2012

    • Inventor(s)
      河野悠介藤田秀司奥本真理中江崇鈴木秀明前田美紀大谷啓一、青木和広
    • Industrial Property Rights Holder
      河野悠介藤田秀司奥本真理中江崇鈴木秀明前田美紀大谷啓一、青木和広
    • Industrial Property Number
      特許: 国際出願 特願2011-052114
    • Filing Date
      2012年02月28日
    • Overseas

URL: 

Published: 2013-07-10  

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