2011 Fiscal Year Research-status Report
新たなリプログラミング法による組織幹細胞作製技術の適正化
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23659899
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| Research Institution | Okayama University |
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Principal Investigator |
窪木 拓男 岡山大学, 医歯(薬)学総合研究科, 教授 (00225195)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
園山 亘 岡山大学, 大学病院, 助教 (40325121)
内部 健太 岡山大学, 大学病院, 医員 (20584618)
大野 充昭 岡山大学, 医歯(薬)学総合研究科, 助教 (60613156)
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| Project Period (FY) |
2011-04-28 – 2013-03-31
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| Keywords | 組織幹細胞 / リプログラミング |
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| Research Abstract |
本研究は，組織前駆細胞から未分化組織幹細胞を作製する，全く新しい"リプログラミング"法の開発を目的とし，以下の計画を立てた．(1)リプログラミング候補因子の一次スクリーニング (2)リプログラミング候補因子の二次スクリーニング (3)同定した因子のリプログラミング能力の詳細な検討 本年度は，(1)を中心に実験を行なった． 具体的には，倫理員会承認のもと，ヒト抜去歯から採取した歯髄組織，歯根膜組織からそれぞれ歯髄細胞，歯根膜細胞を単離した． Hoechst 33342というDNA結合性の蛍光色素を強く排出する細胞群は，SP（Side population）細胞と呼ばれ，フローサイトメトリーによる解析において，その存在を確認することができ，体性幹細胞においてこのSP細胞の画分に未分化組織幹細胞が濃縮されているとの報告がある．そこで，未分化組織幹細胞活性を示すSP細胞をHoechst 33342による核染色後，FACS ariaを用い分離した． 次に，転写後発現調節にタンパク質をコードしないRNA(non-cording RNA)の関与が報告され，その一つであるmicro-RNA (miRNA)が組織の発生や分化を制御しているとの報告から，幹細胞の未分化維持機構にも関与している可能性を考えた．そこで，SP細胞およびそれ以外の細胞（main population 細胞:MP細胞）からRNAを抽出し，miRNA Arrayを行なった結果，未分化維持に関与しているであろうmiRNAが幾つか見つかった．現在，これらのmiRNAの二次スクリーニングを定量性RT-PCR法を用い，行なっている．来年度は，ノックイン・ノックダウンを行い，未分化維持に関与しているか解析をおこなっていく予定である．
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
本年度は一次スクリーニングのmiRNA arrayまで終了し，定量性RT-PCRによる二次スクリーングも開始しており，順調に研究が進展していると考える．
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| Strategy for Future Research Activity |
次年度は，定量性RT-PCRによる二次スクリーングを行い，それによって抽出されたmiRNAに関してノックイン・ノックダウンを行い，未分化維持に関与しているか解析を行なっていく予定である．
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| Expenditure Plans for the Next FY Research Funding |
二次スクリーングの定量性RT-PCRに用いるプライマー及び試薬を購入予定である．また，miRNAのノックダウン実験のためのsiRNAやノックイン用の試薬および細胞移植を行うため，免疫不全マウスを購入する予定である．
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