2012 Fiscal Year Annual Research Report
軸索ガイダンス分子ｄｒａｘｉｎが担う視床皮質軸索投射機構の解明
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23680036
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| Research Institution | Kumamoto University |
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Principal Investigator |
新明 洋平 熊本大学, 大学院生命科学研究部(医), 助教 (00418831)
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| Project Period (FY) |
2011-04-01 – 2014-03-31
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| Keywords | 軸索ガイダンス / draxin |
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| Research Abstract |
本研究では、我々が発見した反撥性ガイダンス分子draxinに着目した視床皮質軸索投射機構の解明を目指したい。サブプレート神経を含む大脳新皮質に発現するdraxinが視床皮質軸索投射に重要であるかどうかを以下の２つの手法(①②)を用いて検証した。① 大脳新皮質に特異的なコンディショナルノックアウトマウスを作製する事を考え、開始コドンとシグナル配列のあるdraxinの第２エクソンの上流と下流にloxpを配置した変異マウスを作製した。最初にコントロール実験として、すべての細胞にCreを発現するCAGGS-Creマウスとの交配により、CAGGS-Cre+/-;draxinloxp/-マウスを作製した。これらのマウスでは、loxp間のexcisionは起こっているにも関わらず、draxin-/-マウスに見られる表現型は観察されなかった。draxinタンパク質は7つのエクソンでコードされており、エクソン３以降で機能タンパク質が合成されていると考えられた。今後の計画では標的領域を変更してdraxin loxpマウスを再作製する。② pCAGGSプロモーター下にloxpを両端に持つβ-geoとさらに下流にdraxin-IRES-eGFPを持つトランスジェニックマウス（TG－draxin+/+）を作成した。draxin-/-との交配により得られるTG－draxin-/-マウスとEmx1-Creマウスを交配させ、draxinノックアウトマウスにおいて大脳新皮質特異的にdraxinの発現を誘導し、視床皮質軸索の投射異常が回復されるかを調べた。その結果、多くの視床皮質軸索が大脳新皮質に向かって投射する事が分かった。この結果から、サブプレートを含む大脳新皮質に発現するdraxinの重要性が示唆された。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
トランスジェニックマウスを用いたレスキュー実験に成功したため、おおむね順調に進んでいる。一方で、コンディショナルノックアウトマウスの作製には失敗したので、再度作製したい。
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| Strategy for Future Research Activity |
今後、新たにコンディショナルノックアウトマウスを作製したい。前回作製したdraxin loxpマウスのES細胞を用いて、重要な機能ドメインをコードするエクソン６の下流にloxpを挿入したマウス（３つのloxpを持つ）を作製する。このマウスでは、Creの存在下でエクソン２－６が切り出される。エクソン７には開始メチオニンになりうる配列がないため、draxinタンパク質が合成される可能性はない。このloxpマウスを用いて、大脳新皮質特異的にdraxinを消失したコンディショナルノックアウトマウスをEmx1-Creマウスとの交配により作製し、その表現型を解析する。
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Research Products
(3 results)
