2012 Fiscal Year Research-status Report
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23700422
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| Research Institution | Nagoya University |
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Principal Investigator |
伊藤 美佳子 名古屋大学, 医学(系)研究科(研究院), 助教 (60444402)
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| Keywords | 重症筋無力症 / 国際研究者交流 / パリ |
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| Research Abstract |
重症筋無力症 (Myasthenia Gravis: MG) はneuromuscular junction (NMJ) への自己抗体に起因する自己免疫疾患である。その約15%は抗MuSK抗体陽性のMuSK-MGであるが、その発症機構は不明である。MuSKはNMJの筋肉側に存在する膜貫通タンパクであり、細胞外領域に4つのimmunoglobulin-like-domain (Ig1, Ig2, Ig3, Ig4) と1つのC6 boxをもつ。本年度はMuSK抗体の機能をさらに詳しく解析するため (i) 5名のMuSK抗体のMuSK-LRP4結合への影響を解析し、(ii) MuSK抗体のMuSKエピトープ解析を行った。
(i) MuSK抗体のMuSK-LRP4結合への影響をin vitro plate binding assayにて解析した。その結果、5名の患者のMuSK抗体は量依存的にMuSK-LRP4結合を阻害した。つまりMuSK抗体はMuSK-ColQ結合を阻害するのみならずMuSK-LRP4結合も阻害することが証明された。
(ii) hMuSKect-mycから各Igを欠失させた4つのコンストラクト (⊿Ig1, ⊿Ig2, ⊿Ig3, ⊿Ig4 ) を作成し、それぞれタンパクを精製した。MuSK抗体の各欠失hMuSKectへの結合能をin vitro plate binding assayにより定量した。その結果、3名のMuSK抗体で⊿Ig1への結合が有意に減少し、5名全てのMuSK抗体で⊿Ig4への結合が有意に減少した。つまり、MuSK抗体はIg1とIg4を認識している。LRP4はMuSKのIg1と結合することが報告されているが、Patients 4, 5の結果より、LRP4はIg4とも結合することが示唆された。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
実験計画に記した(1) Colq-/-マウス骨格筋切片上にColQ-AChE複合体をアンカリングさせるin vitro transplantation実験での抗MuSK抗体の影響(2)プレートに固層化したMuSKに対し、抗MuSK抗体のMuSK-ColQ、MuSK-LRP4阻害を定量化するin vitro plate binding assay(3)抗MuSK抗体受動免疫モデルの骨格筋のAChE-ColQ複合体の定量、の３項目について実験を行い、それぞれの結果を得ることができた。
さらに、研究を進める中で、MG患者抗体がMuSK-LRP4の結合を阻害していることを新たに突き止め、MuSK抗体の認識エピトープの決定についても調査を行った。
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| Strategy for Future Research Activity |
ColQノックアウトマウスの生産が確保できたため、ColQノックアウトマウスを用いた受動免疫モデルでの神経筋接合部各分子の影響、マウス初代培養筋細胞における抗MuSK抗体存在下でのLRP4、MuSK、AChRのシグナル伝達のアッセイを行う予定である。
また、MuSKとColQのinteraction domainを決定するため、MuSKの4つのimmunoglobulin-like-domain (Ig1, Ig2, Ig3, Ig4)にTagを付け、immuno-precipitation法によりColQと結合するdomainを決定する。そのことにより、MuSK MG患者抗体がMuSKとColQもしくはLRP4どちらのinteractionを強く阻害し、MG症状を発症しているのかを解明することができる。
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| Expenditure Plans for the Next FY Research Funding |
次年度の研究費は、今年度の実験を遂行するための備品、消耗品費等と、学会の出席費として使用し、研究の集大成を目指す。
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[Journal Article] Mutations in the C-Terminal Domain of ColQ in Endplate Acetylcholinesterase Deficiency Compromise ColQ-MuSK Interaction.2013
Author(s)
Nakata T, Ito M, Azuma Y, Otsuka K, Noguchi Y, Komaki H, Okumura A, Shiraishi K, Masuda A, Natsume J, Kojima S, Ohno K.
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Journal Title
Human Mutation
Volume: in press
Pages: in press
DOI
Peer Reviewed
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[Journal Article] Four parameters increase the sensitivity and specificity of the exon array analysis and disclose 25 novel aberrantly spliced exons in myotonic dystrophy.2012
Author(s)
Yamashita Y, Matsuura T, Shinmi J, Amakusa Y, Masuda A, Ito M, Kinoshita M, Furuya H, Abe K, Ibi T, Sahashi K, Ohno K.
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Journal Title
J Hum Genet.
Volume: 57
Pages: 368-374
DOI
Peer Reviewed
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[Book] Myopathy2012
Author(s)
Kinji Ohno, Mikako Ito, Andrew G. Engel
Total Pages
270
Publisher
Congenital Myasthenic Syndromes – Molecular Bases of Congenital Defects of Proteins at the Neuromuscular Junction
