2012 Fiscal Year Annual Research Report
化学修飾型基質を特異的に取り込むＤＮＡメチル化酵素を用いたメチル基継承機構の研究
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23710251
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| Research Institution | Tokyo Medical and Dental University |
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Principal Investigator |
野村 渉 東京医科歯科大学, 生体材料工学研究所, 准教授 (80463909)
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| Keywords | 蛋白質 / 遺伝子 / ゲノム / メチル化 / エピジェネティクス |
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| Research Abstract |
本年度の研究において、分割型DNAメチル化酵素の会合様式に関するカイネティクス解析を詳細に行うために得た精製酵素を用いてCDスペクトルの測定を行った。各分割型ドメインのスペクトル、および混合した場合のスペクトルを比較したところ、C末端ドメイン（MeCD）およびN末端ドメイン（MeND）について、混合時のスペクトルは和を示していた。よって、混合時はそれぞれの分割型ドメインの構造的な変化は起きていないことが明らかになった。この測定条件では標的DNAが存在していないため、分割型DNAメチル化酵素が標的配列に結合したのちに会合をしてメチル化活性を発現するという予測に対する根拠の一つが得られたと考えられる。また、標的とするDNA配列の拡張を行うため、テロメア逆転写酵素のプロモーター配列、ASH1、ATF3各遺伝子のコーディング配列に対して結合するジンクフィンガーの構築を行った。分割型酵素のDNA結合ドメインとして、隣接する配列に結合する2個のジンクフィンガードメインが1対になる。それぞれの標的遺伝子に対して約20対のジンクフィンガードメインを構築し、その中から数―数10 (nM)の高いDNA結合活性を有するジンクフィンガードメインを得ることに成功した。また、哺乳類細胞内において活性を有するメチル化酵素の構築を検討するため、ジンクフィンガードメインとDNAメチル化酵素M.HhaIの融合酵素を構築し、細胞内での発現に関する検討を行った。最初の段階では発現が見られなかったが、ファージ由来のメチル化酵素であるM.HhaIの遺伝子配列についてコドンの最適化を行ったところ、良好な発現が確認された。発現が最適化されたメチル化酵素ドメインを基に分割型メチル化酵素の構築を行うことで、細胞内において配列特異的なDNAメチル化を行うことが可能になり、メチル基の継承に関する知見につながると期待される。
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[Journal Article] Low-molecular-weight CXCR4 ligands with variable spacers.2013
Author(s)
Narumi T, Aikawa H, Tanaka T, Hashimoto C, Ohashi N, Nomura W, Kobayakawa T, Takano H, Hirota Y, Murakami T, Yamamoto N, Tamamura H.
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Journal Title
ChemMedChem
Volume: 8
Pages: 118-124
DOI
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[Journal Article] Pharmacophore-based small molecule CXCR4 ligands.2012
Author(s)
Narumi T, Tanaka T, Hashimoto C, Nomura W, Aikawa H, Sohma A, Itotani K, Kawamata M, Murakami T, Yamamoto N, Tamamura H.
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Journal Title
Bioorg. Med. Chem. Lett.
Volume: 22
Pages: 4169-4172
DOI
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