2012 Fiscal Year Annual Research Report
ＤＮＡ損傷に応答してＰＣＮＡをユビキチン化するヒトＨＬＴＦの構造生物学的研究
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23770125
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| Research Institution | Yokohama City University |
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Principal Investigator |
菱木 麻美 横浜市立大学, 生命ナノシステム科学研究科, 特任助教 (60571172)
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| Keywords | X線結晶解析 |
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| Research Abstract |
本研究は、DNA損傷に応答して機能するヒトHLTF (hHLTF) を対象とした構造生物学的研究である。DNA損傷による複製異常は、老化やアポトーシスを引き起こす。DNA損傷による複製停止を回避する戦略の一つがテンプレートスイッチである｡ テンプレートスイッチに関与するhHLTFは全長1009アミノ酸残基からなる。ユビキチンリガーゼ活性を持つRINGドメインとDNAヘリカーゼ活性をもつSnf2ドメインを併せ持つ特殊なタンパク質であり、さらに新奇DNA結合ドメインと予想されるHIRANドメインを持つことが知られている。しかし、hHLTFの立体構造は報告されておらず、詳細な機能、テンプレートスイッチの原子レベルでの反応機構は不明である。
本研究では、テンプレートスイッチの構造基盤、立体構造に基づくHLTFの詳細な機能を解明するために、新奇DNA結合ドメインと予想されるHIRANドメインに着目し、DNAとの複合体のX線結晶構造解析を行った。
その結果、hHLTFのHIRANドメインを高純度に精製する方法を確立し、HIRANドメイン－DNA複合体の結晶構造を1.4オングストローム分解能で決定することに成功した。得られた結晶構造を基に、アミノ酸残基に変異を導入したHIRANドメインタンパク質を調製した。変異を導入したHIRANドメインタンパク質を用いてゲルシフトアッセイを行い、DNAとの結合に重要な残基を特定することに成功した。
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[Journal Article] Identification of small molecule proliferating cell nuclear antigen (PCNA) inhibitor that disrupts interactions with PIP-box proteins and inhibits DNA replication.2012
Author(s)
Punchihewa C, Inoue A, Hishiki A, Fujikawa Y, Connelly M, Evison B, Shao Y, Heath R, Kuraoka I, Rodrigues P, Hashimoto H, Kawanishi M, Sato M, Yagi T, Fujii N.
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Journal Title
J Biol Chem.
Volume: 287
Pages: 14289-14300
DOI
Peer Reviewed
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[Presentation] En bloc transfer of poly-ubiquitin chains to PCNA in vitro is mediated by two different human E2-E3 pairs.2012
Author(s)
Masuda, Y., Suzuki, M., Kawai, H., Hishiki, A., Hashimoto, H., Masutani, C., Hishida, T., Suzuki, F., Kamiya, K.
Organizer
The 8th 3R Symposium
Place of Presentation
Awaji Yumebutai International Conference Center
Year and Date
20121125-20121128
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