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2011 Fiscal Year Research-status Report

亜鉛に応答した遺伝子発現変化に対するエピジェネティック制御機構

Research Project

Project/Area Number 23790163
Research InstitutionSetsunan University

Principal Investigator

木村 朋紀  摂南大学, 薬学部, 講師 (70340859)

Project Period (FY) 2011-04-28 – 2013-03-31
KeywordsMTF-1 / 亜鉛 / メタロチオネイン
Research Abstract

本研究課題では、亜鉛に応答した遺伝子発現についてエピジェネティックな制御機構の存在を明示するとともに、その機序を解明することを目的としている。本年度は、(1)エピジェネティックな影響を与える環境要因・条件を見出すため、リンパ肉腫細胞株P1798細胞を用いた。本細胞は、メタロチオネイン-I (MT-I)遺伝子のプロモーター領域のクロマチン構造が密であるため、定常的なMT-I遺伝子発現が抑制されており、なおかつ、亜鉛によるMT-I誘導が認められないことが知られている。そこでまず、一過性にルシフェラーゼレポータープラスミドをP1798細胞に導入し、外来性のMT-Iプロモーターを介した発現について、定常的な発現および亜鉛による誘導が認められることを確認した。その後、1ヶ月間にわたって高濃度の亜鉛を含む培地で細胞を培養し、MT-I遺伝子発現量を調べた。しかしながら、内因性のMT-I遺伝子の発現量は、この培養により変化することはなかった。エピジェネティックな影響を与える環境要因・条件は、本研究課題を継続するにあたって必須の情報であるため次年度も条件の探索を継続する。次に、(2)MT-Iプロモーターのクロマチン構造変化に関与する因子を明らかにするため、クロマチンリモデリングファクターであるBRG1およびBRMを欠失している細胞株、SW13細胞を用い、これらファクターの強制発現がMT遺伝子発現に与える影響を検討した。その結果、これらリモデリングファクターを発現させることでMT発現量が増加することを明らかにした。次年度は、この時のMTプロモーター領域のクロマチン構造の解析を行い、リモデリングファクター発現とクロマチン構造との関係を明らかにする。

Current Status of Research Progress
Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

エピジェネティックな影響を与える環境要因・条件は、本研究課題を継続するにあたって必須の情報であり、いまだに明らかにできていない点は問題ではある。しかしながら、クロマチン構造と転写速度に関する解析、クロマチン構造変化の持続性に関する解析、クロマチン構造変化に関与する因子に関する解析については、順調に成果が出つつあることから、全体としては、おおむね順調に進展していると判断している。

Strategy for Future Research Activity

SW13細胞を用いた解析により、BRG1およびBRMがMTF-1の関連する転写にかかわっていることを示唆するデータが得られていることから、SW13細胞でのクロマチン構造変化に関する解析を重点的に行う。また、今まではマウスMT-I遺伝子に焦点を当て、その解析を行ってきたが、今後は、他のMTF-1支配遺伝子(MT-II、ZnT1など)に関しても解析を行う。

Expenditure Plans for the Next FY Research Funding

MTF-1によるクロマチン構造変化機構について、これにかかわる因子を調べるために、siRNAを用いた包括的リモデリングファクターノックダウンと、MTF-1と亜鉛依存的に複合体を形成する因子の同定のため、2次元電気泳動・ゲル内消化およびLC-MS/MS解析によるタンパク質同定のために研究費の多くを使用する。また、研究成果を積極的に公表するため、英文校閲、学会参加にも研究費を使用する。

  • Research Products

    (5 results)

All 2012 2011

All Presentation (5 results)

  • [Presentation] The zinc-sensing transcription factor MTF-1 mediates zinc-induced epigenetic changes in chromatin of the mouse metallothionein-I promoter and the epigenetic changes brings enhanced transcriptional activation2012

    • Author(s)
      木村朋紀、古田雄三、奥村文香、保坂卓臣、磯部正和、Glen K. Andrews
    • Organizer
      The International Society of Zinc Biology Conference
    • Place of Presentation
      メルボルン、オーストラリア
    • Year and Date
      20120115-19
  • [Presentation] マウスメタロチオネイン-I遺伝子プロモーター領域におけるクロマチン構造変化と転写量との関連性2012

    • Author(s)
      保坂卓臣、木村朋紀、古田雄三、藤森廣幸、磯部正和
    • Organizer
      日本薬学会第132年会
    • Place of Presentation
      札幌
    • Year and Date
      2012-03-31
  • [Presentation] The zinc-sensing transcription factor MTF-1 mediates zinc-induced epigenetic changes in chromatin of the mouse metallothionein-I promoter2011

    • Author(s)
      木村朋紀、奥村文香、Yong Li、伊藤徳夫、中西剛、磯部正和、Glen K. Andrews
    • Organizer
      2011 International Conference Metals and Genetics
    • Place of Presentation
      神戸
    • Year and Date
      2011年9月4-8日
  • [Presentation] メタロチオネイン遺伝子発現に関わるクロマチンリモデリングファクター2011

    • Author(s)
      保坂卓臣、木村朋紀、射手園雄一、岡田和也、藤森廣幸、磯部正和
    • Organizer
      フォーラム2011 衛生薬学・環境トキシコロジー
    • Place of Presentation
      金沢
    • Year and Date
      2011年10月27-28日
  • [Presentation] メタロチオネイン遺伝子の転写に伴うクロマチン構造変化とその意義2011

    • Author(s)
      木村朋紀、奥村文香、古田雄三、保坂卓臣、藤森廣幸、磯部正和
    • Organizer
      メタロチオネインおよびメタルバイオサイエンス研究会2011
    • Place of Presentation
      名古屋
    • Year and Date
      2011-12-08

URL: 

Published: 2013-07-10  

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