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2011 Fiscal Year Annual Research Report

ヒト臍帯血造血幹細胞の真に安全な新規増幅法開発

Research Project

Project/Area Number 23791088
Research InstitutionFoundation for Biomedical Research and Innovation

Principal Investigator

増田 茂夫  先端医療振興財団, 再生医療研究開発部門, 研究員 (10396749)

Project Period (FY) 2011-04-28 – 2012-03-31
Keywords再生医学 / 造血幹細胞増幅 / ヒト臍帯血 / 移植・再生医療 / トランスレーショナルリサーチ
Research Abstract

【背景・目的】これまでマウス移植系でHoxB4遺伝子導入による造血幹細胞(HSC)の増幅効果が報告されてきた。一方、HoxB4発現レトロウイルスベクターを用いたサル・イヌの大型動物移植系では、マウスでは観察されなかった白血病の高率な発症が示され、安全性が危惧されている。HoxB4は短期間発現で増幅効果を呈するのに対し、長期間発現で白血病を惹起するとされ、そこで我々はセンダイウイルス(SeV)ベクターのうち特にポリメラーゼ遺伝子欠損型SeV(SeV/ΔP)ベクターに注目した。これはウイルスの自己複製能が欠損しておりex vivoでの一過性発現を可能にする。今回このSev/ΔPベクターを用いたHoxB4一過性発現によるヒトHSC増幅に関する有効性と安全性をヒツジ移植系で検証した。
【方法】ヒト臍帯血よりCD34^+分画を分離後、HoxB4遺伝子発現SeVベクターを96時間で計4回感染させた。Sev/ΔP/HoxB4感染細胞は、免疫系が未成熟な45-50日齢(満期147日)のヒツジ胎仔腹腔内へ移植した(HoxB4群;n=4,対照群;n=4)。生後の仔ヒツジ骨髄サンプルを用いたコロニーPCRによりヒト由来造血細胞の割合(ヒトキメラ率)を定量評価した。また定期的な末梢血・骨髄評価により白血病発症の有無をモニターした。
【結果】SeVベクターによるヒトCD34^+細胞への遺伝子導入効率は約70%(MOI=100)で効率良く導入可能であった。10^5個のCD34^+細胞を移植した場合、生後の仔ヒツジ骨髄中のヒトキメラ率は、HoxB4群では対照群の4.8倍と計算された。なお移植後40ヶ月時点で白血病発症は皆無であり、仔ヒツジ骨髄・末梢血中に残存SeVベクターゲノムはPCRレベルで検出されなかった。
【結語】SeV/ΔPベクターにより、ヒトCD34^+細胞への高い遺伝子導入効率を保ちつつ一時的遺伝子発現が可能となった。SeV/ΔPベクターによるHoxB4の一過性発現の結果、ヒツジ胎仔移植の評価系ではヒトHSCが有効に増幅されると同時に安全性も担保されていると考えられた。

  • Research Products

    (21 results)

All 2012 2011

All Journal Article (17 results) (of which Peer Reviewed: 16 results) Presentation (4 results)

  • [Journal Article] Maternal Administration of Busulfan Before in Utero Transplantation of Human Hematopoietic Stem Cells Enhances Engraftments in Sheep2012

    • Author(s)
      Abe T, Masuda S, et al
    • Journal Title

      Exp Hematol

      Volume: (in press)

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Cardiac stem cells in patients with ischaemic cardiomyopathy (SCIPIO) : initial results of a randomized phase 1 trial2012

    • Author(s)
      Masuda S
    • Journal Title

      Lancet

      Volume: (in press)

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Interleukin-2 and Regulatory T cells in Graft-versus-Host Disease2012

    • Author(s)
      Masuda S
    • Journal Title

      N Engl J Med

      Volume: (in press)

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] A simplified in vitro teratoma assay for pluripotent stem cells injected into rodent fetal organs2012

    • Author(s)
      Masuda S, Yokoo T, et al
    • Journal Title

      Cell Med

      Volume: (in press)

  • [Journal Article] Re : Delta-Like Ligand 4-Notch Blockade and Tumor Radiation Response2012

    • Author(s)
      Masuda S
    • Journal Title

      J Natl Cancer Inst

      Volume: (in press)

    • DOI

      doi:10.1093/jnci/djs006

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] IV delivery of induced pluripotent stem cells attenuates endotoxin-induced acute lung injury in mice2012

    • Author(s)
      Masuda S
    • Journal Title

      Chest

      Volume: (in press)

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Dysfunctional transforming growth factor-β signaling with constitutively active Notch signaling in Barrett's esophageal adenocarcinoma2012

    • Author(s)
      Masuda S
    • Journal Title

      Cancer

      Volume: (in press)

    • DOI

      doi:10.1002/cncr.26444

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Ex vivo expansion of human HSCs with Sendai virus vector expressing HoxB4 assessed by sheep in utero transplantation2011

    • Author(s)
      Abe T, Masuda S, et al
    • Journal Title

      Exp Hematol

      Volume: 39(1) Pages: 47-54

    • DOI

      doi:10.1016/j.exphem.2010.09.007

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Cord colitis syndrome in cord-blood stem-cell transplantation2011

    • Author(s)
      Masuda S
    • Journal Title

      N Engl J Med

      Volume: 365(24) Pages: 2336-2338

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Point mutations in myelodysplastic syndromes2011

    • Author(s)
      Masuda S
    • Journal Title

      N Engl J Med

      Volume: 365(12) Pages: 1154-1155

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Evidence for human lung stem cells2011

    • Author(s)
      Masuda S
    • Journal Title

      N Engl J Med

      Volume: 365(5) Pages: 464-465

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] More on NK-cell and B-cell deficiency with a thymic mass2011

    • Author(s)
      Masuda S
    • Journal Title

      N Engl J Med

      Volume: 364(20) Pages: 1979-1981

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Induced pluripotent stem cells in long-QT syndrome2011

    • Author(s)
      Masuda S, Hanazono Y
    • Journal Title

      N Engl J Med

      Volume: 364(2) Pages: 181-182

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] DNMT3A mutations in acute myeloid leukemia : impact on low risk patients with CEBPA mutations2011

    • Author(s)
      Masuda S
    • Journal Title

      J Clin Oncol

      Volume: 29(34) Pages: 4592-4593

    • DOI

      doi:10.1200/JCO.2011.38.2127

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Notch1 and Notch2 have opposite prognostic effects on patients with colorectal cancer2011

    • Author(s)
      Masuda S
    • Journal Title

      Ann Oncol

      Volume: 22(11) Pages: 2533-2534

    • DOI

      doi:10.1093/annonc/mdr307

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Migration of cells from the yolk sac to hematopoietic tissues after in utero transplantation of early and mid gestation canine fetuses2011

    • Author(s)
      Masuda S, Hayashi S, et al
    • Journal Title

      Transplantation

      Volume: 92(2) Pages: e5-6

    • DOI

      doi:10.1097/TP.0b013e318222119f

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Leukemic stem cell gene expression signature and clinical outcomes in acute myeloid leukemia2011

    • Author(s)
      Masuda S
    • Journal Title

      JAMA

      Volume: 305(11) Pages: 1094-1095

    • DOI

      doi:10.1001/jama.2011.299

    • Peer Reviewed
  • [Presentation] In Utero Transplantation to Busulfan-conditioned Sheep Fetuses Enhances Engraftment of Human Hematopoietic Stem Cells2012

    • Author(s)
      Abe T, Masuda S, et al
    • Organizer
      Keystone Synposium (Stem Cells in Development)
    • Place of Presentation
      アメリカ合衆国(サンタフェ)
    • Year and Date
      20120130-20120204
  • [Presentation] 子宮内移植後のヒツジ体内におけるヒトおよびサル造血の長期生着に及ぼす要因2011

    • Author(s)
      新田卓、増田茂夫, et al
    • Organizer
      第104回日本繁殖生物学会
    • Place of Presentation
      岩手(いわて県民情報交流センター)
    • Year and Date
      20110915-20110917
  • [Presentation] Conditioning with Busulfan confers engraftment potential on human hematopoietic stem cells comparable to HoxB4 transduction in sheep in utero transplantation2011

    • Author(s)
      Abe T, Masuda S, et al
    • Organizer
      第9回国際幹細胞学会(ISSCR)
    • Place of Presentation
      カナダ(トロント)
    • Year and Date
      20110615-20110618
  • [Presentation] ヒツジ胎子へのbusulfan投与はヒト造血幹細胞移植後の生着率を向上させる2011

    • Author(s)
      阿部朋行、増田茂夫, et al
    • Organizer
      第58回日本実験動物学会総会
    • Place of Presentation
      東京(タワーホール船堀)
    • Year and Date
      20110525-20110527

URL: 

Published: 2013-06-26  

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