2011 Fiscal Year Research-status Report
ＪＡＫ阻害薬による新規制御性Ｔ細胞誘導機構の解明及び炎症性疾患治療への応用
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23791105
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| Research Institution | The University of Tokyo |
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Principal Investigator |
岡本 明子 東京大学, 保健・健康推進本部, 助教 (40431861)
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| Project Period (FY) |
2011-04-28 – 2013-03-31
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| Keywords | 全身性エリテマトーデス / ＪＡＫ阻害薬 / 関節炎 |
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| Research Abstract |
B6マウスを用い、tofacitinibの投与がLAG3+Tregに与える影響を解析した。安定した薬物動態を保つため、浸透圧ポンプを皮下に埋め込み投与したところ、tofacitinib投与群でLAG3+Tregが増加した。tofacitinib投与群の脾臓LAG3+Tregでは、高いIL-10, Egr2, LAG3 mRNA発現を示した。一方、腎炎発症前のBWF1マウスにtofacitinibを投与してもLAG3+Tregは増加しなかった。tofacitinib投与によるCD4+CD25+T細胞数の変化はみられなかった。次にtofacitinib添加下にナイーブＴ細胞を培養したところ、LAG3+Tregの抗体産生抑制能に重要なEgr2が誘導された。BWF1マウスCD4T細胞ではB6マウスCD4T細胞と比較してEgr2誘導により高い濃度のtofacitinibを要した。BWF1マウスCD4T細胞のtofacitinibへの低反応性は、生体内でのLAG3+Treg誘導の減弱に関与している可能性が考えられた。tofacitinib添加下に培養したCD4T細胞（以下Tofa T細胞）がループスを改善するか調べるため、Tofa T細胞、10%PEGで培養したCD4T細胞、PBSを腎炎発症前BWF1マウスに移入したところ、Tofa T細胞移入群では他群と比較してdsDNA抗体価上昇と蛋白尿進展が抑制された。腎臓組織所見も改善がみられた。これらの成果は、tofacitinibによるLAG3+Treg誘導機構の解析とその炎症性疾患治療への応用の基礎検討として有用と思われる。本研究は2012年日本リウマチ学会国際ワークショップ賞を受賞した。また、コラーゲン誘発性関節炎マウスにTofa T細胞を移入しても、発症が抑制される傾向を観察している。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
現在までの研究でtofacitinibがin vivoでLAG3+Tregを、in vitroでLAG3+Tregの抗体産生抑制能に重要なEgr2をCD4T細胞に誘導することを明らかにし、人為的に誘導したLAG3+Tregがループスモデルマウスの腎炎発症・自己抗体産生を抑制することを示した。この知見は、人為的に誘導したLAG3+Tregの自己免疫疾患治療、tofacitinib以外のEgr2を誘導する化合物のスクリーニングなどの基盤となりうるため。
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| Strategy for Future Research Activity |
(1)TofaT細胞がコラーゲン誘発性関節炎マウスの関節炎発症やII型コラーゲン産生が抑制されるか引き続き検討する。(2)JAKの下流にある転写因子signal transducer and activator of transcription(STAT)は標的遺伝子の転写調節を行っており、サイトカインシグナル伝達、T細胞の機能発揮に重要な役割を果たしている。したがって、tofacitinibによりJak3を中心とした阻害が起き、多種のSTATが抑制された場合に、相対的に特定のサイトカインの作用やSTATのリン酸化が優位となる、suppressor of cytokine signaling(SOCS)の誘導が減弱するなどにより、LAG3+Tregが増加する可能性が考えられる。STATがLAG3+Tregの分化、機能発揮、増殖に及ぼす影響につき、STAT1, 3, 4, 5a/b,6のノックアウトマウスを用いて解析し、より特異的な治療ターゲットの検索を行う。(3)B細胞欠損マウス(mMTマウス)ではLAG3+Tregの減少がみられ、B細胞移入によってLAG3+Treg 数が回復することから、LAG3+Tregの分化には特にB細胞が重要な役割を果たしていると考えられる。mMTマウスにtofacitinibを投与することで、LAG3+Tregに及ぼす影響を検討する。(4)LAG3+Tregにより自己反応性T細胞増殖が抑制されるか検討する。レトロウイルスベクターを用い、SLEの自己抗原であるヌクレオソーム特異的CD4+T細胞(AN3 T細胞)を再構築する。AN3 T細胞はB細胞の抗DNA抗体産生を促進する。AN3 T細胞と脾臓貪食細胞の共培養を行う際に、LAG3+TregもしくはFoxp3+Tregを加えることにより、AN3 T細胞の増殖反応が抑制されるか検討する。
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| Expenditure Plans for the Next FY Research Funding |
コラーゲン誘発性関節炎マウスの関節炎発症や抗II型コラーゲン抗体産生が抑制されるか検討するため、II型コラーゲンとDBA1Jマウス、抗II型コラーゲン抗体ELISAキットを購入する。また、Tofa T細胞を分離するため、CD4+CD62L+細胞分離キット、LSカラムを購入する。STATがLAG3+Tregの分化、機能発揮、増殖に及ぼす影響について検討するため、リン酸化STAT特異的抗体を購入する。サイトカインや転写因子のmRNA発現を検討するため、SYBR GREENを購入する。研究成果を学会で発表するため、一部を旅費に使用する。
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