2011 Fiscal Year Research-status Report
骨形成不全症の診断、重症度判別における尿中骨代謝マーカーの有用性の確立
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23791177
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| Research Institution | Okayama University |
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Principal Investigator |
長谷川 高誠 岡山大学, 大学病院, 助教 (90467738)
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| Project Period (FY) |
2011-04-28 – 2014-03-31
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| Keywords | 骨形成不全症 / 骨吸収マーカー |
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| Research Abstract |
日本国内における骨形成不全症患者(OI)の遺伝子解析を19名行った(うち3名は現在解析中)。このうち約9割のOI患者の原因遺伝子であるI型コラーゲン遺伝子(COL1A1遺伝子、COL1A2遺伝子)のCOL1A1の変異を11名に認めた。いずれもSillence分類において軽症であるI型の患者であり、変異の内訳はsplicing acceptor siteもしくはdonor siteの変異が7名、1塩基の重複が1名、8塩基の欠失が1名、ナンセンス変異が1名、I型コラーゲンの3重螺旋構造の維持に重要であるグリシン-X-Y repeatのグリシンがセリンに変化するミスセンス変異が1例であった。COL1A1, COL1A2の遺伝子変異が陰性であった8名のうち解析途中であるものを含めて、臨床的にI型と考えられる者が1例、II型と考えられる者が1例、III型と考えられる者が2例、4型と考えられる者が1例、結果としてOIではなかった者が３名(重症心身障害児、低出生体重児、遺伝歴からOIを疑われたが結果としてOIではなかった者が1例)であった。これらの8名について常染色体劣性遺伝形式のOIの原因遺伝子であるCRTAP, LEPRE1, PPIB, FKBP10, OSTERIX, SERPINH1, SERPINF1の解析を行ったが、いずれも変異は陰性であった。尿中骨代謝マーカーについては早期の診断を目的とするため1歳未満のOI患児の尿検体を中心として収集しており、5名の尿検体を収集できた。健常児との尿中NTXの違いを今後明らかにしていくために体格や出生時の妊娠週数などの情報をあわせて、健常児及び骨形成不全症患児の骨代謝マーカーによる精度の良い鑑別法を見いだしたいと考えている。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
遺伝子解析については当初の目標である年間20例の解析をおおむね達成できており、変異陽性例も11名同定できている。また骨形成不全症の早期診断を目的とした尿中骨代謝マーカー測定に関しても、生後1ヶ月から12ヶ月までの患者の尿検体を5検体集めることができ、また、健常検体についても収集できている。これまでの収集サンプルと併せて今後、早期診断に向けてのOI患児における尿中骨代謝マーカーの診断閾値の設定及び遺伝子変異の種類との関連性を同定するべく解析を行っている。
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| Strategy for Future Research Activity |
昨年度同様日本全国より骨形成不全症患者の遺伝子解析依頼を受け、また同時に尿サンプルの収集も行う。また、変異陰性であった患者の中にも典型的な1型OIの患児が存在することから、複数のエクソンに渡る欠失やもしくはイントロンの変異が病因となっていないかMLPA法やこういった患者でのmRNAの解析を考慮する。OIの原因遺伝子としてBMP1をはじめ今後もコラーゲン修飾にかかわる遺伝子群が同定される可能性があり、今後原因遺伝子が新規に同定された場合は、この遺伝子に関してこれまでの解析において変異が陰性であった児のサンプルを改めて解析する。尿中骨吸収マーカーを骨形成不全症の早期診断マーカーとすべく、健常新生児及び骨形成不全症患者の尿サンプルを収集し、OI診断の尿中骨吸収マーカーの閾値の設定や遺伝子変異と尿中骨吸収マーカーの関連性についての検討を行う予定としている。
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| Expenditure Plans for the Next FY Research Funding |
遺伝子解析に必要であるDNA抽出試薬、PCR関連試薬(Ampli Taq, PCR purification kit)、シークエンス関連試薬(Big dye、Dye terminator kitなど)を購入する。また変異のスクリーニングに利用しているDHPLCに使用するアセトニトリルなどの溶液、カラムの劣化が進んだ場合は、カラムの購入を検討している。
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