肝内胆管癌における癌関連線維芽細胞（ＣＡＦ）の分離・機能解析と治療標的の検索

2013 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 23791549
• Research Institution: Kumamoto University
• Principal Investigator: 岡部 弘尚 熊本大学, 医学部附属病院, 非常勤診療医師 (40573621)
• Keywords: 肝星細胞 / myofibroblast

Research Abstract

今研究の目的は癌関連線維芽細胞（CAF）をヒト胆管癌組織より分離し、同時に正常肝組織からNormal fibroblast（NF）を分離し、それらの特性を比較することで、前年度の問題点として、分離した細胞がコラーゲンディッシュに接着せず、また、正常星細胞のpurificationについても改良が必要であった。また、正常星細胞の培養も同様に困難であった。ヒトサンプルは組織を採取できる予定がしばしば夕方になること、腫瘍・背景肝組織の個人間のvariationが非常に大きく、プロトコールの調整が困難であることから、まず基本的なプロトコールの樹立のため、マウス星細胞・myofibroblastの分離にとりくんだ。まず、正常星細胞について、BL6 (6 month old)マウスを用いて、Liver perfusionを行い、正常星細胞は、Nycodenzを用いたstandard protocolに修正を加え、pronase、collagenaseIVをdigestion bufferとして用いた。最終的にculture dishへ張り付く細胞を回収し、purificationの specificityを確認すると、血管内皮細胞、マクロファージ分画の除去がどうしても困難であったため、これらの除去を抗体およびcolumn（Miltenyi Biotech）を用いて行い、非常に純度の高い星細胞の分離に成功した。次に、myofibroblastの分離にとりくんだ。慢性肝炎を誘発することで広く知られる、DDC（ diethoxycarbonyl dihydrocollidine） dietを用いて、マウス肝のmyofibroblastを誘発し、同様に分離を行った。より多くのDigestion buffer、Collagenaseを通常の星細胞よりも必要としたが、培養の際はRat tail collagen処理したdishへ良好な培養が可能であった。肝細胞とstellate cellは強固に接着しており、同時に肝細胞を分離培養することは不可能であった。これらのプロトコールをベースに、人胆管癌細胞と、背景肝組織を用いて、現在プロトコールを改良中である。

Research Products

• [Journal Article] CD44s signals the acquisition of the mesenchymal phenotype required for anchorage-independent cell survival in hepatocellular carcinoma. (2014)
  • Author(s): Okabe H, Ishimoto T, Mima K, Nakagawa S, Hayashi H, Kuroki H, Imai K, Nitta H, Saito S, Hashimoto D, Chikamoto A, Ishiko T, Watanabe M, Nagano O, Beppu T, Saya H, Baba H.
  • Journal Title: British Journal of Cancer Volume: 110 Pages: 958-66
  • DOI: 10.1038/bjc.2013.759.
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Macrophage-derived reactive oxygen species suppress miR-328 targeting CD44 in cancer cells and promote redox adaptation. (2014)
  • Author(s): Ishimoto T, Sugihara H, Watanabe M, Sawayama H, Iwatsuki M, Baba Y, Okabe H, Hidaka K, Yokoyama N, Miyake K, Yoshikawa M, Nagano O, Komohara Y, Takeya M, Saya H, Baba H.
  • Journal Title: Carcinogenesis Volume: In press Pages: In press
  • DOI: PMID: 24318997
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Epigenetic therapy with the histone methyltransferase EZH2 inhibitor 3-deazaneplanocin A inhibits the growth of cholangiocarcinoma cells. (2014)
  • Author(s): Nakagawa S, Sakamoto Y, Okabe H, Hayashi H, Hashimoto D, Yokoyama N, Tokunaga R, Sakamoto K, Kuroki H, Mima K, Beppu T, Baba H.
  • Journal Title: Oncology Report Volume: 31 Pages: 983-8
  • DOI: 10.3892/or.2013.2922.
  • Peer Reviewed