2011 Fiscal Year Research-status Report
Ｂｅｖａｃｉｚｕｍａｂ耐性大腸癌に対するＩｔｒａｃｏｎａｚｏｌｅ併用療法の有用性
| Project/Area Number |
23791556
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| Research Institution | Nagoya City University |
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Principal Investigator |
原 賢康 名古屋市立大学, 医学(系)研究科(研究院), 助教 (80528860)
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| Project Period (FY) |
2011-04-28 – 2013-03-31
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| Keywords | 抗血管新生 / VEGF / Bevacizumab耐性 |
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| Research Abstract |
胃癌、大腸癌細胞株、ヒト血管内皮細胞株HUVEC細胞に対してItraconazoleを各濃度にて投与、Itraconazole濃度による増殖曲線を作成したところ癌細胞株各種に対して増殖抑制をきたさないことに対しItraconazoleがHUVEC細胞に対し濃度依存的に増殖抑制をきたすことが確認され10－6Mで50％増殖量となることが確認された。同様にてBevacizumab濃度によるHUVEC細胞の増殖曲線も作成し比較検討したがBevacizumabにては増殖抑制は起こらなかった。更にはAnnexin assayによってItraconazole、Bevacizumab双方の薬剤に暴露したHUVEC細胞のapoptosisをFACS assayにて比較検討した結果apoptosisがItraconazoleにて惹起されていることが証明された。Itraconazoleの作用機序として直接的腫瘍効果、血管内皮細胞に対する抗血管新生効果、さらには腫瘍間質細胞に対する抗血管新生効果のそれぞれを比較検討するため腫瘍周囲の線維芽細胞（cancer associated fibroblast）を臨床検体から分離培養することに成功、今後の解析に使用する予定である。これとは別にItraconazleを付加したHUVEC細胞でのWestern blotを施行、ItraconazoleがmTOR inhibitorの一種であることを突き止めた。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
解析に必要な間質細胞の分離同定に成功、今後の解析を待つ状態となったこと、さらにはこれまで明らかでなかったItraconazoleの作用機序を明らかとすることができたことが今後の進展に対して大きく役立つと考えられる。
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| Strategy for Future Research Activity |
分離同定した間質細胞を用いてItraconazoleによる増殖抑制、タンパク分泌抑制の有無を、これまでと同様の手技にて解析する。
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| Expenditure Plans for the Next FY Research Funding |
(A) Itraconazoleによる腫瘍細胞、並びに間質細胞に対するサイトカイン分泌抑制 各種癌細胞（Bevacizumab耐性株、Bevacizumab感受性株）、並びに間質細胞（線維芽細胞）に対 Itraconazole投与、或いは非投与にて培養、上清を検体としてmulticytokine assayを施行、Itraconazoleによる分泌抑制の起こるサイトカインを列挙、更にそれらについてWestern blot、ELISAにて確認する。更にこれで認めたサイトカインに対して肝転移組織中の発現量を免疫染色を用いて確認する。
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