2013 Fiscal Year Annual Research Report
マイクロＲＮＡによる骨髄間葉系幹細胞の分化の運命付けに関する統合的研究
| Project/Area Number |
23791657
|
|---|
| Research Institution | Saitama Medical University |
|---|
Principal Investigator |
水野 洋介 埼玉医科大学, 医学部, 助教 (30406532)
|
|---|
| Keywords | 細胞分化 / 転写制御 / 非コードRNA |
|---|
| Research Abstract |
Osterixをノックダウンさせたサンプルで発現が顕著に上昇したマイクロRNAであるmiR-Xについて、Osterixによる転写支配を受けているかどうか、さらに骨芽細胞分化に対する影響を確認するため、qPCRによるmiRNA発現上昇の確認、miRNAプロモーター領域のレポーターアッセイ、骨芽細胞分化度合いの定量のためのqPCRやAlkaline phosphatase染色など行って解析した。その結果、miR-Xは骨芽細胞分化を抑制するマイクロRNAであり、またそれ自身はOsterixによって転写抑制を受けるものであることが明らかとなった。miR-Xの骨芽細胞分化過程での発現変動を調べるために、骨芽細胞分化誘導時のサンプルを経時的に採取し、qPCR法によりmiR-Xの経時発現変動パターンを詳細に解析した。その結果、miR-Xは骨芽細胞分化時に緩やかな発現上昇が見られるが、非分化誘導サンプルでは更に劇的な上昇が見られ、分化誘導サンプルと非誘導サンプルの間でのmiR-X発現パターンの顕著な違いが観察された。さらに、miR-Xが抑制制御を行っていると考えられる標的候補遺伝子を同定し、その制御関係をレポーターアッセイを行って検証した。
これらの研究成果より、間葉系幹細胞が脂肪細胞・骨芽細胞などへの分化に寄与するマイクロRNAを探索するために、本研究で行った一連のアプローチを用いることが有効であることが示された。
|
